显微镜使用说明
1，显微镜开关时 卤素灯电压一般应调至最低。
2，转换物镜时，应旋转物镜架，不要用手直接转物镜。
3，荧光光源汞灯由于使用寿命短,为保证尽可能的延长使用时间和
安全，汞灯电源开/关间隔时间必须大于三十分钟。
4，显微镜的各光学部件应调节到位（如，DIC 插件，荧光滤片，物
镜等），以免影响显微镜的正常工作。如果不到位,那么观察时
通常会看到月牙形阴影.
5，使用油镜时应使用专业用油，不要用其它介质（如香柏油），以
免损伤镜头。每次使用完油镜后，需将油镜擦拭干净（物镜及
玻片）。（正置显微镜，油滴在样品上。倒置显微镜，油直接滴
在物镜上。）
6，不要用手直接触摸光学部件的表面（如物镜，荧光模块，目镜等），
以免留下手指印在上面，影响观察效果。
7，在拆卸全自动显微镜的聚光镜，荧光滤片盒（倒置显微镜）等部
件时，应在断电的情况下进行操作。
8，因为各款显微镜的有效工作距离/特性等各有不同，使用前应充
分了解所用仪器的特性及观测范围，以免因不恰当的操作，对
显微镜及其配件造成损害。

提示：1，观测样品时（特别是金相样品），切不可将物镜撞及样品，以免将物
镜镜头压碎。
2，移动显微镜时，应做到小心轻放，以免因震动而对光学部件及光路造
成损害，影响显微镜的使用。（建议移动显微镜时，先将各光学部件拆
除，移位后，再重新安装。）

二 一般观察方式的调节
为了观察和拍摄好图像，需要对显微镜和 CCD 以及 CCD 软件都
要求进行调节。
在进行显微观察和摄影前，首先要做的就是对显微镜进行调节。
调节项目包括柯勒照明、相差环调节、荧光中心调节等。其中后两项 一
般在安装是已经调节好，以后一般情况下就不需要再调节了。
柯勒照明调节方法如下：
1，放一张你即将观察的样本，使用明场照明状态（聚光镜转轮选择 H 或 BF， 荧
光滤镜轮选择空位，DIC 附件全部拉出光路，照相光路转换到观察状态），
10X 物镜，通过粗调和微调将其调节到样本能观察到的最清楚的状态。然后 不
要再动调焦螺旋。
2，将视场光栏和孔径光栏调到最小的状态，如果显微镜的调节状态正确的话， 此时
在视野中应该可以看到一个边缘清楚的多边形。

如果看到的不是一个边缘清楚的多边形，则说明光路中的聚光镜上下位置不
准确，此时通过调节聚光镜左手侧的上下调节旋钮使得视场中形成一个边缘
清晰的多边形，此时的聚光镜位置就是最佳位置，以后的调节或观察的时候 都
不要再移动其位置了。

3，视野中的多边形的正确位置应该是在视野的正中心，如果不在说明光路有偏
移，需要调节柯勒照明光路调节旋钮（聚光器对中螺钉），通过调节聚光镜上 的
柯勒照明光路调节旋钮（两个银色的旋钮）使多边形在视野的中心。

4，将视场光栏慢慢放大，当多边形正好外切于视场的时候就是视场光栏的最佳 工
作位置。在此过程中其他位置的调节不可以再动。

5，保持聚光镜，视场光栏和聚光器对中螺钉的位置，以后不要再调节其位置。
调节好柯勒照明基本上就可以正式观察和拍照了。
明场
任何染色的片子

拍摄明场图像主要就是考虑白平衡和平场问题。因此显微镜的调节也要围绕
这两个方 面来调节。
显微镜可能需要设置主要有以下部分：（先调节好柯勒照明,详见后文）

1， 将荧光滤镜轮转到空位，聚光镜转轮位置也放在空位（O、BF 或 H）一定
不要使用
PH 或 C 或 D
2， 透射光滤光片除了 GIF（绿色）外建议均使用〔NCB（日光平衡片）一定要
使用〕，
这样就不用提高电压也可以提高色温，使得背景光为白色。
3， 放入需要观察的片子，调节调焦装置，使得图像最清楚。

4， 调节聚光镜孔径光栏的位置,使之于物镜的数值孔径一一对应.
(经验值是数值孔径数值X 0.7)，这样观察的图像的对比度才是最佳的效果。
记住每一个换一个物镜都要改变其位置。

5， 使用相机拍摄一张图片，看看是否偏色和光场不匀。如果偏色那么就使用
相机带的 白平衡设置软件来进行白平衡设置。如果光场不匀那么使用相
机软件中的平场校正来校正

相差
没有染色的活细胞等

拍摄相差图片主要考虑的就是相差环和物镜的配合。显微镜主要状态设置如
下：

1， 荧光滤镜轮转到空位，聚光镜孔径光栏打到最大位置（或 PH 位置）。
2， 聚光镜转轮要根据物镜来选择使用哪一个，5X 使用 PHL/PH0，10X 和 20X
使用 PH1，40X 使用 PH2，100X 使用 PH3。这些都写在物镜上。
3， 透射光滤光片除了 GIF（绿色）外均可使用〔NCB（日光平衡片）一定要
使用〕，这
样就提高色温，使得背景颜色更白一些。
4， 拍摄相差图像时就可以直接拍摄黑白图像。因此可以使用相机的黑白模式
来拍摄。
5， 使用相机拍摄一张图片，看看是否光场不匀，如果光场不匀那么使用相
机软件中的平场校正来校正

荧光观察和拍摄
观察和拍摄荧光主要就是通过滤镜轮来选择不同的激发光来激发样品。对显微
镜来说 一般不需要进行调节。显微镜主要状态设置如下：
关闭透射光照明， 将所需要的荧光滤光块放入光路，选择所要使用的物镜，打
开荧光光闸，直接观察就可以了。透射光光路的设置对荧光观察不起任何作用。不需要
对其作调节。

DIC 观察
DIC 作为一种更高级的观察活细胞方法，其使用方法较为复杂。主要的 DIC
附件包括 四部分（起偏器，检偏器，两个 DIC 棱镜），观察时都要使用，缺少任
何一件，都将对观察 效果产生很大的影响。具体调节步骤如下：
1、 透射光照明，尽量使用较强的光强，荧光滤镜轮转到空位（有的倒置镜转
到 DIC 位 置），聚光镜转到 DICⅠ或Ⅱ（根据物镜下 DIC 棱镜上的标记
选择，这两个棱镜是配套 使用的）
2、 将起偏器，检偏器放入观察光路，调节调焦机构，直至观察到样品。
3、 此时的观察效果可能不是最好的。我们可以一边观察，一边调节物镜下的
DIC 棱镜，使得样品的反差和浮雕效果达到最佳状态。

三 显微镜调节一般步骤
孔径光栏
： 其主要作用是调节进入视场的光的多少，这个对于观察和拍摄图 片

来说都是很重要的。它同时控制分辨率、对比度、景深等要素。它们不能各自
独立的进行调节。

孔径光栏的调节是要和物镜上的数值孔径一一对应的，经验值是数值孔径数值 X
0.8（如 10X 物镜的数值孔径是 0.30，那么对应的孔径光栏的调节位 置就应该是
0.3X0.8＝0.24）

相差环的调节方法如下
：工具：调中望远镜

相差显微镜安装完成后，先调节柯勒照明，然后将目镜取下，换上调中望远镜
（或使 用目镜筒中集成的伯兰特透镜），将物镜和其对应的相差环放入光路，调节
调中望远镜的高 低，直至可以清楚的看到一个黑色的圆环和一个亮的圆环。。调节的
目的就是将这两个环重合。 调节是通过调节聚光镜上的相差环上的调节螺丝来完
成的。
显微镜的清洁与保管
无论是显微观察还是显微照相，检查并保持光路系统的清洁是特
别重要的。
A， 可能需要清除尘埃的部位：聚光镜，物镜，目镜，及载物
台表面等（其他位置非ZEISS工程师不允许拆卸清洗）。清
洁时先用一个吹风球或软毛刷去掉附着在表面的灰尘和其
他异物，然后再做擦拭。
B， 擦拭各镜头时有以下注意事项：
1， 擦拭液选用乙醚酒精混合液（乙醚：无水酒精＝7：3）
2， 擦拭时一定要采用专用镜头纸或长纤维的脱脂棉签。
3， 擦拭方法如