能复合成白光的两种颜色的光叫互
补色光。物质所显示的颜色是吸
收光的互补色。
分光光度分析法是以物质对光的选 择性吸收为基础的分析方法。
根据物 质所吸 收光的 波长范 围不同
可见分光光度法 紫外分光光度法 红外分光光度法
几乎所有的无 机离子和许多有机 化合物可以用分光 光度法进行测定。 如土壤中的氮、磷 以及植物灰、动物 体液中各种微量元 素的测定。

单光束分光光度计实现参 比的方法
用空白液校准完仪器后放入浸提液，测定 其吸光度，然后在制作标准曲线和测定样 品的时候，同时减去参比的吸光度； 例如：用空白液校完仪器后，测定参比的 吸光度为 0.006，而样品测定吸光度为 0.447 ，则带入标准曲线计算的实际吸光度为 0.441 ，这样就扣除了参比对测定结果的影 响。
二、分光光度计的类型
1.单光束
简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度， 一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高 的稳定性。
2.双光束
自动记录，快速全波段 扫描。可消除光源不稳定、 检测器灵敏度变化等因素的 影响，特别适合于结构分析。 仪器复杂，价格较高。
3.双波长
将不同波长的两束单色光(λ 1、λ 2) 快束交替通过同一
吸收曲线的讨论
（1）同一种物质对不同波长光的吸光度不 同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长 λmax （2）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线 形状相似λmax不变。而对于不同物质，它们的 吸收曲线形状和λmax则不同。 （3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据 之一。
吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。△=
1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。A 原理来自光栅 和棱 镜分 光原 理
双光束光度计动画示意
动画
双波长光度计光路示意图
医疗器械产品对紫外吸光度的要求 ——GB 8368-2005 、 GB 8369-2005
将浸提液通过孔径为 0.45μm 的滤膜进行过 滤，以避免漫射光干扰。在制备后 5h 内， 将该溶液放人1cm的石英池中，空白液放入 参比池中，用扫描 UV 分光光度计记录 250 nm-320 nm波长范围内的光谱。 以吸光度对应波长的记录图谱报告结果。 上述方法试验时，浸提液的吸光度应不大 于0.1
在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来
的分析方法称为吸光光度法,主要有:
红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围 2.51000 m ,主要用于有机化合物结构鉴定。
紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围
200400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围 400750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。
第二章 紫外-可见分光光度分 析法
吸光光度法的基本原理
颜色的产生白光(太阳光)：由各种单色光组成的复合光
有色物质的不同颜色是由于吸收了不同 波长的光所致。溶液能选择性地吸收某些 波长的光，而让其他波长的光透过，这时 溶液呈现出透过光的颜色。透过光的颜色 是溶液吸收光的互补色。有色溶液对各种 波长的光的吸收情况，常用光吸收曲线来 描述。将不同波长的单色光依次通过一定 的有色溶液，分别测出对各种波长的光的 吸收程度（用字母A表示）。以波长为横 坐标，吸光程度为纵坐标作图，所得的曲 线称为吸收曲线或吸收光谱曲线。
仪器
紫外-可见分光光度计
一、基本组成
general process
光源 单色器 样品室 检测器 显示
1. 光源
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具 有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作 为光源，其辐射波长范 围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。 发射185～400 nm的连 续光谱。
（4）不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差异，在
λmax处吸光度A 的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。
（5）在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸
收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。
KMnO4的颜色及吸收光谱
叶绿素的结构和吸收光谱
第二节 紫外可见分 光光度计
2.单色器
将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任 波长单色光的光学系统。
①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；
②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或 凹面反射镜，将分光
后所得单色光聚焦至
出射狭缝； ⑤出射狭缝。
3.样品室
样品室放置各种类型的吸收池 （比色皿）和相应的池架附件。吸 收池主要有石英池和玻璃池两种。 在紫外区须采用石英池，可见区一 般用玻璃池。
4.检测器
利用光电效应将透过吸收池的 光信号变成可测的电信号，常用的 有光电池、光电管或光电倍增管。
5. 结果显示记录系统
检流计、数字显示、微机进行 仪器自动控制和结果处理

简单的说，吸光度就是表示物质对光的 吸收程度
三个基本过程
（1）能源提供能量； （2）能量与被测物之间的相互作用； （3）产生信号。 基本特点： （1）一般光分析法均包含三个基本过程； （2）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于 色谱分析）； （3）涉及大量光学元器件。
溶液颜色与光吸收的关系
光波是一种电磁波。电磁波包括无线电波、 微波、红外光、可见光、紫外光、x射线等。如果 按照其频率或波长的的大小排列，可见光只是电 磁波中一个很小的波段。见表12－1
通常，待测物质的 含量1～10－5％时， 能够用分光光度法 准确测定。所以它 主要用于测定微量 组分。
光分析法：基于物质发射的电磁辐射或电 磁辐射能量与待测物质相互作用后所产生 的辐射信号与物质组成及结构关系所建立 起来的分析方法 吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或 某一物质前的入射光强度 与该光线通过溶 液或物质后的透射光强度比值的以10为底 的对数（即lg(Iin/Iout)，影响它的因素有溶 剂、浓度、温度等等。