第二章习题一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶E. RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。

B. 它们的识别序列完全相同。

C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。

D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。

E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ）A. 37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B )A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。

B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。

C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。

D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。

E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。

5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D )A. 1/44B. 1/66C. 1/64D.1/46E. 1/1066. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C )A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。

B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。

C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。

D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。

E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。

8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）A. Na +B. Ca2+C. Mg2+D. Zn2+E. Mn2+9. RFLP形成的原因是（ A ）A. 由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。

B. 使用不同的限制性内切酶进行切割。

C. 杂交时使用不同的探针。

D. 每种染色体存在两条。

E. 提取不同的染色体DNA酶切。

10. 下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（ E ）A. Sau.3A IB. B.amH IC. pst ID. Ecor IE. Hind III11. 需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（ D ）A. 反应时间B. 反应体积C. PHD. 限制酶量E.反应温度12. 下列酶在反应中不需要ATP的是( D )A. E coKB. T4DNA连接酶C. BamH ID. EcoBE. DNA pol I13. 限制性内切酶可特异性识别 ( B )A. 双链DNA的特定碱基对B. 双链DNA的特定碱基序列C. 单链RNA的特定碱基序列D. 单链DNA的特定碱基序列E 双链RNA的特定碱基对14. 下列与RFLP相关的一条是( D )A. 不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。

B. 两种物种个体间的限制性图谱。

C. 同一个体等位基因的限制性图谱。

D. 同一物种不同个体的限制性图谱。

E. 非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。

15．限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（ A ）A. 识别和切割序列发生变化。

B. 切割活性大大提高。

C. 识别和切割序列与原来完全不同。

D.可以任意切割DNA。

E. 只能部分切割DNA。

二、多选题1. 下列因素中影响限制酶切割的有( A,B,C,D,E)A. EDTA浓度B. 甘油浓度C. DNA纯度D. 酶的自身活性E. 盐浓度2. 限制酶反应中出现星活性的可能原因是（A B D E）A．酶浓度太高 B 低盐 C 盐浓度过高 D 高PH E 甘油浓度>5%（V/V）3．限制酶切割后的DNA电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（B，C，D，E）A．酶失活 B 有蛋白质与DNA结合 C 酶切条件不合适D 有外切核酸酶污染E 星号活性4．下列有关回文序列的描述正确的是（A，B，C）A．是II类限制酶的识别序列 B 是某些蛋白的识别序列 C 是基因的旁侧序列 D 是高度重复序列E 是卫星序列5．下列有关回文序列的一般特征正确的是（B，C，D，E）A．可增强基因表达 B 有对称轴 C 是自我互补的序列D．两条链从5‘ 3‘方向的序列一致 E 是II类限制酶的识别序列6．关于II类限制酶说法正确的是（B，D）A．具内切核酸酶和甲基化酶活性B．仅有内切核酸酶活性C．只识别非甲基化的DNA序列D． II类限制酶反应条件只需要Mg2+E． II类限制酶反应需要Mg2+,ATP7．通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（B，C）A．限制酶只切割两个变异等位基因中的一个B．限制酶位点可作为遗传标记C．它不依赖变异的等位基因的产物的功能D．不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异E．同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同8. 下列关于II类限制酶的叙述正确的是（B，C，D，E）A．它既有内切酶的活性，也有外切酶活性B．在特异位点对DNA进行切割C．同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列D．有些限制酶切割双链DNA产生粘末端E．有些限制酶切割双链DNA产生平末端9．限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A．限制酶无活性 B 存在抑制剂如SDS，EDTA C DNA不纯D．缓冲液组成不合适 E DNA甲基化10．下列关于限制酶的叙述正确的是（B，C，D）A．在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。

B．限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。

C．如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。

D．已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。

E．能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。

11．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（A，B，C，E）A．储存温度不合适 B 稀释后储存 C 储存缓冲液不合适D．分装后储存 E 储存缓冲液中蛋白浓度低12．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A．限制酶失活 B 有抑制剂如SDS，EDTA等存在 C 反应条件不合适D DNA不纯E DNA结构（线形或超螺旋）的影响13．如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（B，C，E）A．限制酶失活 B 限制酶的星号活性 C 有其他限制酶污染D 有抑制剂存在E 测试DNA中有其他DNA污染14．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（A，B，C，E）A．限制酶去除不完全 B 平端连接 C 核酸外切酶污染D．连接反应温度低于16℃E．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类15．下列限制酶属同裂酶的是（A，B，D，E）A．BamHI G↓GATCC Sau3AI ↓GATCCCTAG↑G CTAG↑B． Sal I G↓TCGAC Xho I C↓TCGAGCAGCT↓G GAGCT↓CC． BamH I G↓GATCC EcoR I G↓AATTCCCTAG↓G CTTAA↓GD. Hpa II G↓CGC Msp I C↓CGGCGC↓G GGC↓CE. Xba I T↓CTAGA Nhe I G↓CTAGCAGATC↓T CGATC↓G三．填空题1．限制酶是一类专门切割 DNA 的酶，它能特异性识别切割双链（单、双）DNA。

2．II型限制酶识别位点一般长度为 4~6 个核苷酸对。

3．个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（RFLP）。

4．限制酶命名采用Smith和A thens提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的属名；第二、三个字母取自来源细菌的种名；第四个字母（如果有）取自来源菌的株系。

5．需要部分酶切时可采取的方法有（1）减少酶的用量（2）缩短反应时间（3）增大反应体积。

6．限制酶识别序列为n个碱基，则其切割频率的理论值应是 4n。

7．限制性内切酶通常保存在 50% 浓度的甘油溶液中。

8．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在 5% 以下。

9．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。

10．II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。

它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。

四．简答题1．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？答：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。

2．如果用EcoR I酶切DNA时出现星活性，试分析原因？答：主要原因有：酶浓度太高；高PH；低盐；含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金属离子；甘油浓度高于5%；存在某些有机溶剂。

3．下列序列中哪些可能是II类限制酶的识别序列？ATATCG CCCGGG GATATC AGCCGA GAGTC答：CCCGGG GATATC GAGTC4．用Klenow酶可将5‘粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切后用klenow处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？XmaI C↓CCGGG BssH II G↓CGCGC PstI CTGCA↓GHhaI GCG↓C HpaII G↓CGC答：BssH II, HpaII5．当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？答：要避免星活性及部分酶切。

（1）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二种酶；（2）用一种酶消化后，以酚：氯仿：异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将DNA重新溶解与适合第二种酶的缓冲液，加第二种酶消化；（3）先低温酶，后高温酶；（4）使用通用缓冲液。

6．试计算下列三种限制酶各自在某染色体DNA序列上的切割概率Sau3A I GATC Pst I CTGCAG Hinf I GANTCAcy I GPuCGPyC答： 1/44；1/46；1/44；（1/44）x(1/22)7．一长为4.2kb的DNA片段，分别用EcoRI、PstI及EcoRI+PstI消化，电泳结果如下图所示，请根据结果绘出该片段限制性图谱0.7kb0.7kb 0.8kb1.5kb 1.4kb2.0kb2.0kb 2.8kbEcoRI Pst I EcoRI + Pst I答： EcoRI PstI EcoRI0.7kb 0.7kb 0.8kb 2.0kb回收与连接一．单选题1．用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（C）A．略短 B. 等长 C. 略长 D. A或B都可 E . A、B、C都可2．用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（B）A．透析膜要接触DNA区带一侧的胶缘。