实验方案
一、实验题目：
新鲜蔬菜中铁元素含量的测定
二、概述：
到目前为止，前人已经开发出许多测定铁的方法，如分光分度法，原子吸收法，滴定容量法，原子发射光谱法，电感耦合等离子体质谱法，电化学法，化学发光法，重量法，荧光熄灭法等，其中常量测定铁含量经典方法是用SnCl2还原Fe3+，以甲基橙为指示剂进行滴定即滴定容量法，而最常见的测定微量铁的方法为分光分度法。

三、实验原理：
新鲜蔬菜中含有微量的铁元素，使用邻菲罗啉分光分度法测定微量铁，邻菲罗啉是测定微量铁的一种较好的试剂。

PH值在2~9的条件下，Fe2+与邻菲罗啉生成稳定的橙红色络合物，反应式如下：
3R+Fe2+=【FeR3】2+
该络合物的lgK为21.3，摩尔吸收系数为110000，基于橙红色络合物对可见光的吸收，可以用该方法测定样品中的总铁。

显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+还原成Fe2+，反应式如下：
2Fe3+ +2NH2OH·HCl=2Fe2+ +N2+4H+ +2H2O+2Cl-
四、试剂用量和配制
1）100ug/ml铁标准溶液：准确称取0.1721g分析纯的NH4Fe(SO4)2·12H2O于200mL烧杯中，加入4mL6mol/LHCl和少量水，溶解后转移到200mL容量瓶中，稀释至刻度。

2)1%盐酸羟胺水溶液:称取盐酸羟胺固体1g，用量筒量取99m l水溶解至200ml烧杯中。

3）pH=4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液：称取13.6g分析纯乙酸钠，加12mL冰乙酸至容量瓶中，加水稀释至刻度.
4）1.5g/L邻菲啰啉溶液：准确称取邻二氮菲0.15g，置于烧杯加热溶解后，移入100ml容量瓶中，定容，摇匀。

5）2mol/l HCl溶液：用移液管准确移取浓盐酸10ml于50ml容量瓶中，定容，摇匀。

6)1：1 HCl溶液：用移液管准确移取浓盐酸25ml于50ml容量瓶中，定容，摇匀。

五．实验步骤：
1.预处理：将10~15 g的菠菜尽量碎化，然后使用坩埚，酒精喷灯将碎样加热灰化（注意通
风），用酸浸取，取浸取液分离鉴定。

除了灰化处理之外，也可以取菜的汁液进行分析。

2.绘制邻菲罗啉-铁(II)吸收曲线：用吸量管吸取0.0mL和1.0mL铁标准溶液分别于50mL容量瓶中，各加盐酸羟胺溶液1mL，HAc-NaAc溶液5mL，10ug/mL邻菲罗啉溶液2mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

放置10min后用1cm比色皿，以显色剂作参比溶液，在分光光度计上从波长440~600nm每隔10min测量一次吸光度。

在最大吸收峰附近，每隔5nm测量一次吸光度。

以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制邻菲罗啉-铁（II）的吸收曲线，找出最大吸收峰的波长。

3.标准曲线的绘制：用吸量管分别吸取100ug/mL铁标准溶液0mL,0.2mL,0.4mL,0.6mL,0.8mL,1.0mL于6只50mL容量瓶中，依次分别加入盐酸羟胺1mL,HAc-NaAc5mL，1.5g/L邻菲罗啉2mL,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

放置10min，用1cm 比色皿，以显色剂溶液作参比，用分光光度计在其最大吸收波长处，分别测定吸光度A。

以吸光度A为纵坐标，铁含量（mg/50mL）为横坐标，绘制标准曲线。

4.试样中铁含量的测定：用吸量管吸取1mL生菜的浸取液（汁液）于50mL容量瓶中并加入各种试剂使其显色，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

放置10min，用1cm比色皿，以显色溶液作参比，用分光光度计测定其吸光度。

然后由标准曲线求出相应铁含量，并计算生菜中的铁含量。

六．影响实验准确度的因素有以下几点：
1.试剂配制准确性。

2.实验设计不够细致。

3.菠菜中的铁离子被提取出的完全度。

4.分光光度计的用法不够准确。

七．主要仪器和试剂
仪器：722型分光光度计、酒精喷灯1个、坩埚1个、研钵1个、50mL容量瓶10个、25mL 移液管1个、分析天平、电子天平
试剂：NH4Fe(SO4)2·12H2OL（分析纯）、盐酸羟胺固体、乙酸钠(分析纯)、冰乙酸、邻二氮菲、浓盐酸
八．参考资料：
《分析化学实验》---汤又文主编
《蔬菜食品中铁含量的测定》---杨洋，刘林贵，顾陈锋著。