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・实验研究・
微小ＲＮＡ一１０ａ对大鼠心肌缺血再灌注后
脑钠肽的影响
牛少辉 张丽华 简立国 汪涛
李恩
作者单位：４５００１４郑州大学第二附属医院心内科
通信作者：李恩，Ｅｍａｉｌ：ｌｎｌ０２５ａｓｄｆｇｈ＠ｓｏｈｕ．ＣＯＢ

缺血再灌注模型，用ｍｉＲ．１０ａ激动剂（ａｇｏｍｉｒｓ）进行干 预，观察左心室重量指数、组蛋白去乙酰化酶２基因 （ＨＤＡＣ２）ｍＲＮＡ、脑钠肽（ＢＮＰ）蛋白，探讨ｍｉＲ－１０ａ与 上述指标之间的关系。
材料与方法 １．材料：ｍｉＲ．１０ａ ａｇｏｍｉｒｓ由上海ＧｅｎｅＰｈａｌｑｌｌａ公司
（ＬｖｗＩ：ＬｖＷ／体重）。取左室缺血再灌注区（ＬＶＩＲＺ） 心肌，保存于一８０℃冰箱中，用于荧光定量ＰＣＲ。 ４．大鼠缺血再灌注区心肌ＨＤＡＣ２ ｍＲＮＡ的检
ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｉｎｆｌｉｃｔｅｄ ｂｙ ｌｉｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｏｆ ｒａｔｓ．Ａｆｔｅｒ
Ｂ（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝１ ５） Ｃ（ｍｉＲ一１０ａ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝１５）．Ｒａｔｓ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｃ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｉＲ一１０ａ ａｇｏｍｉｒｓ（８０ ｍｇ／ｋｇ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）ｂｙ ｔａｉｌ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ４ ｗｅｅｋｓ，ａｎｄ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ａ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ Ｂ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｅａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ２（ＨＤＡＣ２）ｍＲＮＡ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ
０．２６，２．６１±０．１１，ａｎｄ ２．４１士０．１２ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎ ｇｒｏｕｐｓ Ａ，Ｂ ａｎｄ Ｃ．Ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｕｐ Ｂ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ Ｃ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＤＡＣ２ ｍＲＮＡ ａｎｄ ＢＮＰ ｉｎ ｔｈｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｚｏｎｅ ａｎｄ ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ ｉｎ
ＰＥＩＯ管紧靠在一起。结扎前降支，以心脏远端紫绀及
线，换算出各自的起始模板量（由仪器自动读出），然
后用目的基因（ＨＤＡＣ２）的定量结果除以管家基因 （ＧＡＰＤＨ）的定量结果（即ＲＮＡ量校正）就可以得到不
同样品之间的目的基因（ＨＤＡＣ２）相对表达量。目的 基因ＨＤＡＣ２的反应参数为９５
万方数据
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ｕｌａｒ ｒｅｍｏｄｃｌｉｎｇ ＩｎＲＮＡ． ａｆｔｅｒ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ
ｉｎ
ｒａｔｓ
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ｖｉａ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
取标准样品２“１，加用试剂ＳＹＢＲ
Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ
Ｉｘｌ ｃＤＮＡ。
Ｔａｑ。Ｍ（具 体步骤参见试剂说明书），分别使用目的基因仅一肌动
蛋白（Ｏｔ．ＳＭＡ）和管家基因［甘油醛一３．磷酸脱氢酶 （ＧＡＰＤＨ），主要用于对所有样品进行归一化处理］在
ＧｅｎｅＡｍｐ ５７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ＢＮＰ免疫组织化学试剂盒（上海雅吉酶联生物科技有限 公司）；荧光定量ＰＣＲ仪（郑州大学基础医学院）。 ２．动物模型建立及实验分组：１０周龄雄性Ｗｉｓｔｅｒ
Ｎｉｕ Ｓｈａｏｈｕｉ，Ｚｈａｎｇ Ｌｉｈｕａ，Ｊｉａｎ Ｌｉｇｕｏ，Ｗａｎｇ Ｔａｏ，Ｌｉ Ｅｎ
ｏｆ
Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ矿Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００１４，Ｃｈｉ—
Ｍ Ｃｏｍｅ．ｅｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｉ Ｅｎ。Ｅｍａｉｌ：ｌｎｌ０２５ａｓｄｆｇｈ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ，ｍｉＲ）一１０ａ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘ— ｏｆ ｂｒａｉｎ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｅｐｔｉｄｅ（ＢＮＰ）ｉｎ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒｔｙ—ｆｉｖｅ ｍａｌｅ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ Ａ ｉｎｊｕｒｙ （ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝１５）ａｎｄ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝３０）．Ｒａｔｓ ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ
大鼠，体重２５０—３００ ｇ，由郑州大学实验动物中心提
Ｄｅｔｅｃｔｏｒ仪进行扩增，其产物
用于标准曲线的制作。然后分别使用目的基因
供，４５只雄性Ｗｉｓｔｅｒ大鼠随机分为假手术组（Ａ组， 圮＝１５）心肌梗死组（ｎ＝３０），采用大鼠腹腔注射氯胺
酮（５０ ｍｓ／ｋｇ）和戊巴比妥钠（６０ ｍｇ／ｋｇ）进行麻醉。气 管插管，连接小动物呼吸机进行辅助呼吸，应用加热垫
ＨＤＡＣ２
ｍＲＮＡ的表达，ＢＮＰ蛋白含量，左心室重量指数显著升高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
结论ｍｉＲ．１０ａ可能通过抑制ＨＤＡＣ２ ｍＲＮＡ的表达来抑制ＢＮＰ的产生，从而改善大鼠缺血再灌注 后心肌重塑。
【关键词】微小ＲＮＡ．１０ａ；组蛋白去乙酰化酶２基因；脑钠肽；
伤；心肌重塑
心肌缺血；再灌注损
微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ，ｍｉＲ）是一类生物进化过程中 高度保守的非编码小分子ＲＮＡ，其并不编码蛋白质， 但通过对基因表达、蛋白质翻译及靶ＲＮＡ的稳定性的
调控，参与到许多重要的生物过程中。我们建立大鼠
资料于上述各组分别为１２、１０和１２只。本研究涉及
大鼠的护理和使用的所有实验程序由郑州大学第二附 属医院的伦理委员会进行了审查和批准。 ３．大鼠左心室重量指数的测定：４周后处死大鼠。 处死前大鼠称重后，３％戊巴比妥钠３０ ｍｓ／ｋｇ腹腔麻 醉，迅速开胸，取出心脏，分别称取全心（ＨＷ）和左心 室（含室间隔）重量（ＬＶＷ），并计算左心室重量指数
ｏｆ
ＨＤＡＣ２
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
ｉｓｃｈｅｍｉａ；
ＭｉｃｒｏＲＮＡ一１０ａ；Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ２；Ｂｒａｉｎ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ；
Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ
Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ
ｉｎｊｕｒｙ；
Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ ｉｎ Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（１４２１０２３１０１０９）；Ｔｈｅ Ｋｅｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｇｅｓ ａｎｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ ｉｎ Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（１５Ａ３２００１９）
ｍＲＮＡ
的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法测定ＢＮＰ蛋白的含量。结果ｍｉＲ—ｌＯａ ａｇｏｍｉｒｓ干预４周后，Ａ、Ｂ、Ｃ ３组心肌
ＨＤＡＣ２
ｍＲＮＡ相对表达量［ＨＤＡＣ２ ｍＲＮＡ／甘油醛一３一磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡ］分别为６．５８±
０．２３×１０～、１４．２９±２．１６×１０～、１０．１１±１．５５×１０～。左心重量指数分别为２．１０±０．２６、２．６１士 ０．１１、２．４１士０．１２。Ａ组缺血再灌注区心肌中ＨＤＡＣ２ ｍＲＮＡ的表达，ＢＮＰ蛋白含量，左心重量指数 与Ｂ、Ｃ组比较显著降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；Ｂ组与Ｃ组比较，缺血再灌注区心肌中
测：采用ＳＹＢＲ
Ｇｒｅｅｎ
Ｉ荧光定量ＰＣＲ检测ＬＶＩＲＺ心
ｍｇ
提供；荧光定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）试剂（包括如下：
ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ
肌ＨＤＡＣ２ ｍＲＮＡ相对表达量：取冻存心肌约１００
Ｔａｑｌ～，核糖核酸酶抑制剂、脱氧核糖
剪碎，用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取总ＲＮＡ（具体步骤参见试剂说
明书）。取２斗ｌ总ＲＮＡ用随机引物Ｏｌｉｇｏ ｄ（Ｔ）１８和鼠
基金项目：河南省科技攻关计划项目（１４２１０２３１０１０９）；河南省高等学校重点科研项目
（１５Ａ３２００１９）
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡ一１０ａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ
ｐｅｐｔｉｄｅ ａｆｔｅｒ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ
ｔｅｒ
Ａｆ－
４ ｗｅｅｋｓ，ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＤＡＣ２ ｍＲＮＡ ｉｎ ｇｒｏｕｐｓ Ａ，Ｂ ａｎｄ Ｃ ｗａｓ ６．５８±０．２３×１０～， １４．２９±２．１６×１０—５．ａｎｄ １０．１１±１．５５×１０—５ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｆｉｅｕｌａｒ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ ｗａｓ ２．１０±
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１６．０５．０３０
【摘要】
目的观察大鼠缺血再灌注后组蛋白去乙酰化酶２基因（ＨＤＡＣ２）ｍＲＮＡ、脑钠肽
（ＢＮＰ）的表达，并用微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ，ｍｉＲ）－１０ａ激动剂（ａｇｏｍｉｒｓ）对其干预，探讨其与心肌重塑的 关系。方法４５只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为假手术组（Ａ组，ｎ＝１５）和缺血再灌注组（ｎ＝３０），通 过结扎左冠状动脉前降支（ＬＡＤ）制作缺血再灌注模型。模型制作成功２４ ｈ后，心肌梗死组再随机 分为缺血再灌注对照组（Ｂ组，ｎ＝１５）和ｍｉＲ・１０ａ ａｇｏｍｉｒｓ干预组（Ｃ组，ｎ＝１５）。ｍｉＲ一１０ａ ａｇｏｍｉｒｓ干 预组予以尾静脉注射ｍｉＲ－１０ａ ａｇｏｍｉｒｓ（８０ ｍｇ／ｋｇ），Ａ组和Ｂ组给以阴性对照试剂尾静脉注射，每周 １次，持续４周。利用实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ）法检测缺血再灌注区ＨＤＡＣ２