光合细菌菌株NS的生 长曲线
三、实验器材
➢菌种 培养不同时段的大肠杆菌。
➢仪器或其他用具 分光光度计，比色皿等。
四、实验步骤
1.样品测试前的调试
➢开电源，仪器预热20 min，将波长调至600 nm处。
➢打开样品室，将挡光体插入比色皿架，将 其推或拉入光路。
➢盖好样品室盖，按0%键调零透射比。 ➢取出挡光体，按100%键调100%透射比。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
一、实验目的
• 了解大肠杆菌的生长特性与规律，绘制生 长曲线
• 掌握光电比浊法测量细菌数量的方法
二、实验原理
➢生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。 一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
2.样品测定
➢将参比溶液（未接种的LB液体培养基）以及 被测溶液倒入比色皿中。
➢打开样品室盖，将参比溶液放在样品架的第 一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位 。
➢将参比溶液推入光路，按100%键调满度。
➢将测试方式调至吸光度方式。此时,显示器显 示“0.000”。
➢将被测溶液推入光路，显示器显示为被测样 品的吸光值。
比色皿之间吸光度进行比较。
五、作业
1、结果 P88
记录不同大肠杆菌培养液的OD600值，并绘制 大肠杆菌的生长曲线。
2、思考题 第1题
根据稳定期的生长规律，可知稳定期是产 物的最佳收获期，也是最佳测定期，通过对稳 定期到来原因的研究还促进了连续培养原理的 提出和工艺技术的创建。
微生物数量的测定方法
➢平板菌落计数法 ➢显微镜直接计数法 ➢光电比浊法
➢平板菌落计数法
对样品稀释培养，据形成的菌落数计数：操作复杂。 ➢显微镜直接计数法 使用血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。 缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。
微生物生长曲线示意图
1、延迟期
特点：生长速率常为零、菌体粗大、 RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境 的抵抗能力下降。
成因：微生物刚刚接种到培养基之上 ，其代谢系统需要适应新的环境，同时要 合成酶、辅酶、其他代谢中间代谢产物等 ，所以此时期的细胞数目没有增加。
2、对数期
特点：生长速率最快、代谢旺盛、酶系 活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、细胞 的化学组成形态理化性质基本一致。
在600 nm波长下，用未接种的LB液体培养 基作空白对照，分别对培养了0、4、8、12、 16和20 h的大肠杆菌培养液，进行光电比浊测 定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要用未接 种 的 LB 培 养 基 进 行 稀 释 ， 使 其 吸 光 值 在 0 . 1 0.65范围内。
比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品 润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面 只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。
➢光电比浊法
光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细 胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在 溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中 测定时所吸收的光线越多。
优点：简便快速，适合于自动控制。 缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品 样品不适合用此法。
利用一系列菌悬液测定光密度和菌数 ，制作标准曲线，再根据被测样的光密度 计算出含菌量。
成因：主要是外界环境对继续生长越 来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、 继而导致大量细菌死亡。
根据微生物的生长曲线可以明确微生物的 生长规律，对生产实践具有重大的指导意义。
根据对数期的生长规律可以得到培养菌种 时缩短工期的方法:接种对数期的菌种,采用最 适菌龄，加大接种量，用与培养菌种相同组成 的培养基。
成因:经过调整期的准备，为此时期的微 生物生长提供了足够的物质基础，同时外界 环境也是最佳状态。
3、稳定期
特点：活细菌数保持相对稳定、总细菌数 达到最高水平、细胞代谢产物积累达到最高峰 、是生产的收获期。
成因：营养的消耗使营养物比例失调、有 害代谢产物积累、PH值等理化条件不适宜。
4、衰亡期
特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、 整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细 胞死亡出现自溶现象。