第二章《基因工程》复习题一、选择题1. 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（D）A 修复自身的遗传缺陷B 促进自身的基因重组C 强化自身的核酸代谢D 提高自身的防御能力2.生物工程的上游技术是（D）A 基因工程及分离工程B 基因工程及发酵工程C 基因工程及细胞工程D 基因工程及蛋白质工程3. 基因工程操作的三大基本元件是:(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体) （A）A. I + II + IIIB. I + III + IVC. II + III + IVD. II + IV + V4. 多聚接头（ Polylinker ）指的是（A）A. 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段B. 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段C. 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段D. 含有多种启动基因的人工 DNA 片段5.下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是（D）A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6. 若将含有 5' 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3' 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是（D）I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶A. IIIB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III7.下列有关连接反应的叙述，错误的是（A）A. 连接反应的最佳温度为 37 ℃B. 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C. 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD. 连接酶通常应过量 2-5 倍8. T 4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（D）A. 2' -OH 和 5' –PB. 2' -OH 和 3' -PC. 3' -OH 和 5' –PD. 5' -OH 和 3' -P9. 载体的功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力) （D）A. IB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III10.克隆菌扩增的目的是 (I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因III 表达外源基因) （D）A. I + IIB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III11. 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（C）A. 大肠杆菌－繁殖迅速B. 枯草杆菌－分泌机制健全C. 链霉菌－遗传稳定D. 酵母菌－表达产物具有真核性12.考斯质粒（cosmid）是一种（B）A. 天然质粒载体B. 由λ -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体C. 具有溶原性质的载体D. 能在受体细胞内复制并包装的载体13. 某一重组 DNA （ 6.2 kb ）的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。
用 SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有（D）A.4 个 B. 3 个 C. 2 个 D. 至少 2 个14. 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是 (I 融合基因能稳定扩增 II 融合蛋白能抗蛋白酶的降解 III 表达产物易于亲和层析分离 ) （D）A.IIIB. I + IIC. I + IIID. II + III15.提高重组率的方法包括 (I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间) （A）A. I + IIB. I + II + IIIC. I + III + IVD. II + III + IV16.识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（ B ）A.同工酶B.同尾酶C.同裂酶D.同位酶17.pBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（ ABD ）A.AmP r和Tet rB.ori复制子cZ标记D.多克隆位点18.λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（ D ）A.小于λ噬菌体DNA的50%B. 小于噬菌体DNA的75%C.大于λ噬菌体DNA的105%D.为λ噬菌体DNA的75%～105%19.DNA连接酶的功能是 ( AB )A.恢复3’-OH与5’-P之间的磷酸二酯键B. 恢复缺口C.恢复裂口D.可使平末端与粘性末端连接20.PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件( A B C D )A.AmP rB.ori复制子cZ标记D.多克隆位点21.下列属于获取目的基因的方法的是( D )①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术⑤利用DNA转录⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥22.的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 BA．提高受体细胞在自然环境中的耐药性B．有利于对目的基因是否导入进行检测C．增加质粒分子的分子量D．便于与外源基因连接23. 有关基因工程的叙述正确的是 DA．限制酶只在获得目的基因时才用B．重组质粒的形成是在细胞内完成的C．质粒都可作为运载体D．蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料24.哪项不是基因表达载体的组成部分( B )A.启动子B.终止密码C.标记基因D.目的基因25.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( B )A．基因枪法 B．显微注射法C.农杆菌转化法 D．花粉管通道法26.以下说法正确的是（ C ）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因控制的性状都能在后代表现出来27.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（ D ）A、能复制B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNA28.有关基因工程的叙述中，错误的是（ A ）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶29.有关基因工程的叙述正确的是（ D ）A、限制酶只在获得目的基因时才用B、重组质粒的形成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料30.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。
在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（ C ）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达31.下列获取目的基因的方法中需要模板链是（ B ）A.从基因文库中获取目的基因B.利用PCR技术扩增目的基因C.反转录法D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成32.下列有关基因工程的叙述中，错误的是 ACA 、DNA连接酶将粘性末端的碱基对连接起来B、基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C、基因治疗主要是对有缺陷的进行修复D、蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料二、是非判断题1.DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也可修复裂口。
（×）2.质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。
（×）3、入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。
（√）4、原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。
（×）5、 cDNA文库是包含有细胞中所有mRNA，因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。
（ X ）三、填空题1、在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为阴性克隆。
2、理想的质粒克隆载体应具备以下基本条件，如能自主复制、一种或多种限制酶的酶切位点、筛选标记、分子量小易拷贝。
3、点突变的基因系列在碱基替换中，若为一个嘌呤换成另一个嘌呤或一个嘧啶换成另一个嘧啶者称转换，若一个嘌呤换成一个嘧啶或一个嘧啶换成一个嘌呤者称颠换。
4、基因表达的四大表达系统分别为大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞。
5、基因与载体的平末端连接方法有哪些T4连接酶连接法。
末端核苷酸转移酶加同聚物尾巴后，再用DNA连接酶进行连接；化学合成衔接物后连接DNA分子。
6、如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？抗性标记筛选；抗性基因插入失活筛选；LacZ基因失活筛选。
7、核酸操作的基本技术有哪些①核酸提取与纯化②核酸的检测与保存③核酸的凝胶电泳④核酸分子杂交8、基因工程所需的基本条件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的载体；3、用于基因转移的受体菌或细胞。
9、Klenow酶在有 dNTP 情况下，呈现DNA聚合酶活性，在没有dNTP 情况下呈现外切酶活性。
10、利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_____聚合酶链式反应__________，是一项在生物__体外__复制____特定DNA片段___的核酸合成技术②原理：__DNA复制________③条件：_____已知基因的核苷酸序列______四种脱氧核苷酸______一对引物______、_____DNA聚合酶____________________.前提条件：④方式：以_指数____方式扩增，即__2n__（n为扩增循环的次数）⑤结果使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增11．PCR技术扩增过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成____单链DNAb、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部__双链______。
c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的__DNA链______。
四、名词解释1.同尾酶某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶2.柯斯（C0S）质粒带有λ噬菌体的COS位点和整个pBR322的DNA 顺序的大肠杆菌质粒。
3.SD序列为mRNA能在细菌核糖体上产生有效结合和转译的特殊序列。
4.质粒不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。