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二电泳缓冲液、染料和凝胶加样液配置方案
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L乙酸
100 mmol/L EDTA
水
242g
57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)
200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
补5%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
15%聚蔗糖(400型)
水
1.5ml 1%溴酚蓝
1.5ml 1%二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)
100ul 10%SDS
5ml
补足到10ml
100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝
0.2%二甲苯青FF
200 mmol/L EDTA
0.1%SDS
50%甘油
水
20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
50%甘油
水
1.5ml 1%溴酚蓝
1.5ml 1%二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
40%聚蔗糖
水
1.5ml 1%溴酚蓝
1.5ml 1%二甲苯青FF
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚蓝
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(400型)
水
2.5ml 1%溴酚蓝
2.5ml 1%二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水
54g
27.5g硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
补足1L
染料
1%溴酚蓝(bromophenol blue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.3 N氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18%聚蔗糖(400型)
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
水
300ul 10N氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)