课题1微生物的实验室培养1．培养基物质。

的营养生长繁殖的不同需求，配制出的供其营养物质概念：人们按照微生物对(1) 1.培养基中含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等营养物质。

2．实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。

3．固体培养基的配制过程为：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板。

4．平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种的常用方法。

5．消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物；灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括孢子和芽孢。

碳源营养成分：水、无机盐、(3)、氮源、特殊营养物质pH，此外还要满足微生物生长对氧气及的要求。

2．无菌技术(1)目的：获得纯净培养物。

(2)关键：防止的入侵。

外来杂菌(3)不同对象的无菌操作方法[连线]：1．下面是查氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，请根据下述培养基，回答下列问题：蔗糖15 g(1)提示：固体培养基。

因为该培养基加入了凝固剂琼脂。

(2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的几类营养物质？分别是什么？提示：4类物质。

分别是碳源、氮源、无机盐和水。

(3)蔗糖提供的是哪类营养物质？NaNO3提供的是哪类营养物质？提示：蔗糖提供的是碳源。

NaNO3提供的是氮源和无机盐。

(4)在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物所需要的哪些条件？提示：满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需要。

2．探讨培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶所采用的灭菌或消毒方法。

提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。

3．消毒与灭菌的相同点与区别分别是什么？提示：消毒是杀灭病原微生物和有害微生物，并不要求杀灭一切活的微生物；而灭菌则是杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。

[跟随名师·解疑难]1．培养基的成分1．制备固体培养基2．纯化大肠杆菌(1)方法：平板划线法①：通过接种环在琼脂稀的操作，将聚集的菌种逐步连续划线固体培养基表面释分散到培养基的表面。

：将菌液进行一系列的梯度稀释②稀释涂布平板法的菌液分别涂布到稀释度，然后将不同琼脂固体培养基的表面，进行培养。

37未接种鉴定：将接种后的培养基和一个(2)的培养基都放入和12 h恒温箱中，培养_℃24 h后，分别记录观察。

(3)菌种保存：对于频繁使用的菌种，可以采用甘油管临时保藏法；对于需要长期保存的菌种，可以采用藏法。

1．培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。

2．如果需要调节培养基的pH，应在哪一步骤后进行？提示：溶化后，灭菌前。

3．在用平板划线法接种大肠杆菌时，第一次划线前、每次划线前及划线操作结束后，都要灼烧接种环，请分析其目的分别是什么。

提示：提示：将接种后的培养基和一个未接种的培养基，都放在37 ℃恒温箱中培养，观察并记录结果。

[跟随名师·解疑难]1．微生物培养中有关实验操作的注意事项(1)倒平板操作：①培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。

②培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。

③整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。

④平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，造成污染。

⑤若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应丢弃。

(2)平板划线操作：①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。

②灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

③划线时最后一区域不要与第一区域相连。

④划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。

2．稀释涂布平板操作(1)稀释操作时：每支试管及其中9 mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处。

(2)涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”，应特别注意：①酒精灯与培养皿的距离要合适。

②吸管头不要接触任何其他物体。

③吸管要在酒精灯火焰周围使用。

3．平板划线法和稀释涂布平板法的比较[例1]A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源B．除水以外的无机物仅提供无机盐C．凡是碳源都能提供能量D．有些无机氮源也能提供能量[解析] 对异养型微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。

如蛋白胨既是碳源又是氮源和能源，葡萄糖是碳源同时又是能源。

除水以外的无机物种类繁多，如CO2和N2是无机物，但也是某些微生物的碳源和氮源。

CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。

NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐。

硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源。

[答案] D归纳拓展几种微生物的营养能量来源[例2]A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3～5条平行线即可D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养[解析] 在培养基上接种时，一定要做到无菌操作，以防止杂菌污染影响实验或研究的结果。

微生物无处不在，包括空气中也充满了各种微生物，所以无菌操作显得很困难，但在酒精灯火焰附近约10 cm的四周为无菌区，因而菌种试管和待接种试管管口不能离开火焰附近，接种环、棉塞也不能离开火焰附近。

接种完毕之后为了防止菌体污染，要在火焰上灼烧管口和接种环。

为防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，应将平板倒置。

[答案] D易错提醒要建立有菌观念，接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有被污染的可能，必须严格地消毒灭菌。

同时，在实验室中，不可吃东西、喝水，离开时一定要洗手，以防被微生物感染。

使用过的培养基要经过高压蒸汽灭菌后才能丢弃，以免污染环境。

[随堂基础巩固]1．下列叙述正确的是( )A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌解析：选A 培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。

培养基的种类根据划分依据的不同而不同，如根据化学成分可分为天然培养基和合成培养基。

固体培养基是液体培养基添加凝固剂形成的，其他成分均相同。

单个的微生物形体微小，肉眼无法看到，必须借助仪器才能看到，在固体培养基上用肉眼观察到的是一个菌落。

2．下列操作错误的是( )A．用酒精擦拭双手B．用氯气消毒水源C．实验室用紫外线进行消毒D．玻璃器皿(吸管、培养皿)用酒精直接擦拭即可达到彻底灭菌的目的解析：选D 玻璃器皿、金属用具等耐高温、需要保持干燥的物品，应采用干热灭菌法进行灭菌，而用酒精直接擦拭达不到彻底灭菌的目的。

3．下列关于牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备，叙述错误的是( )A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时进行倒平板D．等平板冷却凝固约5～10 min后将平板倒过来放置解析：选A 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时，其操作顺序为计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板；由于牛肉膏比较黏稠，称量时可连同称量纸一同放入烧杯；待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板；平板冷凝后，应将平板倒过来放置，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

4．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。

下列叙述正确的是( )A．培养基分装到培养皿后进行灭菌B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D．培养过程中每隔一周观察一次解析：选B 培养微生物过程中应先灭菌再倒平板；每一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件；培养过程中观察间隔的时间一般不超过24 h。

[课时跟踪检测](满分50分时间25分钟)一、选择题(每小题3分，共24分)1．下列关于平菇培养的操作程序，正确的是( )A．配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养B．配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养C ．配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养D ．配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养解析：选D 培养平菇常用的培养基有棉子壳、花生饼、玉米芯等，具体的操作程序是：配制培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养。

)(为唯一碳源的自养微生物营养的描述错误的是2CO ．下列有关一种以2 A ．氮源物质为该微生物提供必要的氮素B ．碳源物质也是该微生物的能源物质C ．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D ．水是该微生物的营养要素之一，属于无机物，不能作为微生物的能源物质。

2CO 该碳源是 B 解析：选 3．无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是( )A ．对培养操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B ．对培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌C ．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行D ．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触解析：选A 灭菌是采用强烈的理化因素对用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基进行处理，使物体内外一切微生物，包括芽孢和孢子都要被杀死；实验操作者的衣着和手以及操作空间只能进行消毒。

4．关于实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作，下列说法正确的是( )A ．配制培养基、倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行B ．倒平板时，倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C ．划线接种时，灼烧接种环后立即进行再次划线D ．划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养解析：选D 倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，配制培养基不需要在酒精灯火焰旁进行，A 错误；倒入培养基后应立即盖上培养皿的皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B 错误；划线接种时，灼烧接种环后要待其冷却后才能进行再次划线，C 错误；划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养，D 正确。

5．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱的目的是( )A ．对比观察培养基有没有被微生物利用B ．对比分析培养基是否被杂菌污染C ．没必要放入未接种的培养基D ．为了下次接种时再使用解析：选B 放入未接种的培养基，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染。

6．为了保存菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述错误的是( )A ．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B ．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C ．临时保藏菌种容易被污染或发生变异D ．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4 ℃保藏的方法解析：选D 对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3 mL 甘油瓶中加入1mL 的甘油后灭菌，将1 mL 的菌液转移到甘油瓶中，放在－20 ℃的冷冻箱中保存。