三、试剂与器材
1. 试剂 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml 80％(V／ 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml 80％(V／ V)硫酸（!）中，当日配制使用。 V)硫酸 硫酸（ 标准葡萄糖溶液：(0．1mg／m1)100ml葡萄 标准葡萄糖溶液：(0．1mg／m1)100ml葡萄 糖用蒸馏水定容至1000ml(可滴加几滴甲苯作防 糖用蒸馏水定容至1000ml(可滴加几滴甲苯作防 腐剂) 腐剂)。 2. 器材 样品、移液器、试管、分光光度计、水浴锅。
实验一 糖的定量测定--蒽 糖的定量测定--蒽 酮比色法
一、目的要求
掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。 掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。
二、原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 糖在浓硫酸作用下， 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲 基糠醛, 基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成 蓝绿色糠醛衍生物， 620nm处有最大吸收 处有最大吸收。 蓝绿色糠醛衍生物，在620nm处有最大吸收。在一 定范围内,颜色深浅与糖含量成正比， 定范围内,颜色深浅与糖含量成正比，故可用于糖的 定量。 定量。 蒽酮可与其他一些糖类发生反应， 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜 色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时， 色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时， 反应不稳定，呈现红色。 反应不稳定，呈现红色。 本法多用于测定糖原含量， 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄 糖含量。 糖含量。
四、操作步骤
1、标准曲线的制作 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。 只试管，按照下表的次序加入试剂。
管号 步骤 标准葡萄糖溶液/ml 标准葡萄糖溶液/ml 蒸馏水/ml 蒸馏水/ml 0 1.0 0.1 0.9 0.2 0.8 0.3 0.7 0.4 0.6 0.5 0.5 0 1 2 3 4 5
七、思考题
1、本法多用于测定什么样品？ 本法多用于测定什么样品？ 2、加蒽酮试剂时为什么要冰浴中冷却？ 加蒽酮试剂时为什么要冰浴中冷却？ 3、分光光度计的操作步骤及注意事项？ 分光光度计的操作步骤及注意事项？
五、计算
1、从标准曲线上查得样品浓度 、 2、利用直线方程，计算得样品浓度 、利用直线方程，
六、注意事项
1、各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸水 各试管的处理应一致， 中，再同时从沸水浴中取出。 再同时从沸水浴中取出。 2、加样要精确，否则测出的值会有很大的误差。 加样要精确，否则测出的值会有很大的误差。 3、测A620时，应该要等试管冷却之后才能进行测 A620时 定。
混匀，冰浴5min 混匀，冰浴5min 蒽酮试剂/ml 蒽酮试剂/ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
沸水浴中10min，取出，自来水冷却， 沸水浴中10min，取出，自来水冷却，室温放置 10min， 620nm处比色 10min，在620nm处比色 A620nm
2、样品浓度的测定——取1ml待测糖，步骤同上 、样品浓度的测定 待测糖， 取 待测糖