准备：盖玻片、4%多聚甲醇、50%的甘油PBS 4%多聚甲醛溶液:
多聚甲酵40g O.lmol/L 磷酸缓冲液至1000 mL
方法:称収40g 多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500-800 mL 0.1 mol/L 磷酸缓冲液, 加热持续搜拌( 或磁力搅拌) 使粉末完令溶解, 通常需滴加少许NaOH才能使溶液清亮,最后补足0.1 mol/L 的PBS至1000 mL,充分混匀。

0.1 M (pH 7.4) PBS
1 mol/L Na2HP04
77.4ml
1 mol/L NaH2P04
22.6ml
蒸馏水
加至1000
1 爬片的准备
爬片可用一般的盖玻片也可用专用爬片, 根据自己的需要剪裁成合适的大小, 以备置于6孔板、1 2孔板或24孔板; 将剪裁好的爬片, 泡酸过夜, 捞出后流水洗净, 烤干浸泡于75%酒精中备用
2 细胞爬片
用胰酶消化好细胞, 充分吹打, 使之成细胞悬液, 计数, 根据需要调整细胞到适当
密度。

取无菌的细胞培养板, 先加少量培养基(以使玻片与培养板紧密接触) 。

将
玻片小心从洒精中取出, 在酒精灯火焰外焰轻轻划过, 使玻片表面酒精燃烧从而起到灭菌的效果。

待冷却后, 将玻片轻轻放入培养板中, 然后将单细胞悬液一逐滴的滴到上而。

然后置于37°C 5%C02 的细胞培养箱屮培养。

培养一定时间后培养液换为含材料的培养液继续共培养( 2ml, 100卩g ml-1 in DMEM ) 6h
后，用PBS 冲洗两遍去除未被吞噬的纳米颗粒，然后取出爬片。

对于贴壁能力
较弱的细胞, 爬片前应将玻片置于细胞培养板中, 用PLL 包被至少Ih 。

3 细胞固定
爬片置于37 ° C PBS中洗三次,每次10到20秒钟,然后在4%多聚甲醛中室温固定15 分钟, 然后再用37° C PBS 将多聚甲醛冲干净, 清洗过程要注意手法轻柔, 否则细胞会从玻片上脱落。

固定后的细胞爬片置于滤纸上晾干, 然后用50% 的甘油PBS溶液封片,备用。

4 共聚焦显微镜
激发690nm, 荧光在400nm 左右。