高效液相色谱法测定邻苯二甲酸酯实验报告记录作者:日期: 2高效液相色谱法测定邻苯二甲酸酯1553607胡艺蕾实验时间：2017年4月1日实验温度：19.0 C、实验目的1、了解高效液相色谱仪的组成及其工作原理和基本操作。

2、对邻苯二甲酸酯进行分离和测定。

3、探究不同流动相及不同流动相比例对流速、柱压、保留时间及分离度的影响。

4、了解液相色谱法定量测定的原理。

二、实验原理1、实验采用的反相液固吸附色谱法，其分离机理是：当流动相通过吸附剂时，在吸附剂（固体相）表面发生了溶质分子取代吸附剂上的溶剂分子的吸附作用。

固体相为非极性分子，如十八烷基键合相，流动相为极性分子。

2、组分分子与吸附剂之间作用力的强弱决定它的保留时间。

溶质分子官能团的性质和分子结构的空间效应都会影响其出峰的顺序。

本次实验为邻苯二甲酸酯，其分子官能团都相同，但由于DMP其官能团相邻的烷基较小，导致其保留值最小，因此出峰顺序为：DMP（邻苯二甲酸二甲酯）＞DEP邻苯二甲酸二乙酯）＞DBP（邻苯二甲酸二丁酯）。

3、在吸附色谱中，流动相的洗脱能力与溶剂的极性有关，极性越大，洗脱强度也越大。

本次实验使用的三个流动相的极性大小为：水＞乙腈＞甲醇。

通常选择二元混合溶剂作为流动相。

4、定量分析中，定量峰与其他峰之间的分离程度称为分离度R:通常用塔板数n来描述色谱的柱效:三、实验仪器与试剂1、仪器Agilent1260高效液相色谱仪:脱气机：真空室内半透膜管路，对流动相进行脱气四元泵：二元泵各控制一种溶剂可设置的流速范围：0.001 - 10 mL/min 0.001 mL/min 步进UV检测器：用于检测通过样品后的紫外光类型：双光束光路设计光源：氘灯波长范围：190 - 600 nm手动进样器：进样20L色谱柱：填料汁八烷（适合中性、弱酸碱）4.6x 100mm, 3.5 1 m2、试剂流动相：纯水、甲醇、乙腈样品：DMP、DEP DBP四、实验步骤1、开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动软件。

2、预先脱气（直到导管中无气泡），设定波长：220nm。

3、设定流速、流动相比例等参数，选择合适的流动相。

4、进样阀柄置于“ LOAD',进样针用乙醇洗涤2-3次，取样，进样，将进样阀扳至5、保存并处理数据。

五、实验结果1、样品：DMP1:20水溶液201 L流动相的比例为：高纯水：30%乙腈：70%流速:“INJECT。

1.00ml/min4'□3□530% 乙腈：70% 流速：1.00ml/min3、样品：DMP1:20 L 流动相的比例为：高纯水 卩L 流动相的比例为：高纯水：30%乙腈：70%流速：1.00ml/min2、样品：DMP1:10水溶液20卩 峰f 呆留时间类型II ■―峰賣 [min] — ————— III峰Ifti 枳 [jnAU*s|WWW 士 II (mAUj _ _ __ 1 峰商积——.= --------- -- 1 t[min |II 三三三» 1 10 ・ 900 BV|| 0.09041 73.02935 1 11-6&934 15.5497 2 1 .O5& W 0.1905 59.15406 4-200LB 4.4938 3 1,460 W 0+08T4 1110,66235 101.60928B4M01S 4 1 ・ 664 VB 0.0750 19,02767 3.67077 1.4460 5 1 . 954 BB0.0701 54.0669711-993104.10B8峰保宙时问案里峰面积MH 師秋[mln ][m£n )(niAU s)-- ---- 1 ------------ ——11 ----------------- i ------------------ 1- •— --------1 0. 519 BVS5.1B733 a_7135»i.22-1 ：| 2 1.113 W 0.1915 26 S13S4 2.22521 1.0»42 3 1,472 W o^asso22£8.75055 341,447814 1-670 V B0-072634,50-162 6.95740 1.4113盟65.19249m 汁】2水溶液10峰保留时间类型# [min]_ 1 1峰宽[min]峰面积trrAU^sJ1[mAU]峰面积----- 1------- ----- 1 - -----I1 911 BV- -- ---- | ~0.0987141,88142---- ----- -5<520017.0^582 1.073 VB0,196446.12571 3.523247.90943 L.457 3V0.058L 449.1L6.6104276.4 L t95L BB0.06GL S2.?3S9512.33248 3.9624比较1和2的峰面积和峰高可以发现，在进量一定时，峰面积和峰高与样品的浓度成正比。

比较1和3可发现，在样品浓度相同时，峰面积和峰高与样品的进量成正比。

因此我们可以得出结论，峰面积和峰高与加入样品的物质的量成正比，这也是液相色谱法进行定量分析的依据。

对这三组数据画出标准曲线：2500标准曲线图y = 1204.9X -129.35 •2000R2= 0 99891500■峰面积1000•峰高500y = 151.31X + 36.69•R2= 0.9976亠……・—・■…*- .......0.000.50 1.00 1.50 2.00 2.50由标准曲线可以看出：峰面积和峰高与样品的量基本成线性关系，且峰面积的相关性比峰高的相关性要高，更适合用于定量分析。

64、样品：混合样品1:10水溶液20卩L流动相的比例为：高纯水：30%甲醇：70%流速: 1.00ml/min峰保雷时㈣类曆*1窒[minj IcrAU) *•[BiinjL1 V10.D923II125.35835119-M02aVZ.418B2 1.⑷ VB 0.0723 491 7 W9 9.73S0L a. 9»13—9 £V 21fi2.QD7SL 337.54473 4】・517Q4 1.917 VB 0.1144 虹.69561 5.55612 S1995 2.292卫弐0.11745<ne,siiCT. 907 903».制吗&11+259 VB 0,3061~T邑口P9126637.GB59714.4198计算分离度和塔板数R i2=2.292-1.519/(0.0995+0.1174)/ 2=7.128 R23=11.259-2.292/(0.3067+0.1174)/ 2=42.29n DMP=16*(1.519/ 0.0995)A2=3.729E3 n DEP=16*(2.292/0.1174)A2=6.098E3n DBP=16*(11.259/ 0.3067)A2=2.156E45、样品：混合样品1:10水溶液20卩L流动相的比例为：高纯水:1.00ml/min30%乙腈：70%流速:10.786 EV .970151 O*4_5丄」2 0 .380 W O L 0677 2S.07561 5.06304 0.40723 0 +沂4V B0.1176 62t25€5«7.252624 1 + 462 EV0.I19D 2曲I J屈55 2E33.74652 40L44385 VB0*0763 41*6774^ fl.10254 0.73306 1+ 559 EB0.076^ 2325.39429 460.43224 JI.03727 0* IE 91.99125 15.计算分离度和塔板数R i2=5.087 R23=33.59n DMP=2.415E3 n DEP=1.052E4 n DBF=2.408E46、样品：混合样品1:10水溶液20卩L流动相的比例为：高纯水：30%乙腈：70%流速: 0.70ml/min蜂面积■★简积t [mi n 1[min] [mAU *5]gU] %1 ------1 IM乎•**-11BV一—^一—0.1450--------- ———IIII11.1261L―-— 11.35172 1.52^ w Q.236S 122.52773 化10Q4L九49B13 2. w0.120&3370.13291394.72775 ^L.2C5342,370VB a.iD2»M.HSM 3.18036 0.5959S3266-^52^4501.弭4酸39.$42弓«9.004 0,iOS7125L.B9&4B 94 -咖旳二5”3C45计算分离度和塔板数R DMP=2.781-2.088/(0.1200+0.0993)/ 2=6.320 R DEF=8.004-2.781/(0.0993+0.2087)/2=33.92 n DMP=16*(2.088/0.1200F2=3.633E3 n DEP=16*(2.781/0.0993)A2=1.255E4n DBP=16*(8.004/0.2087)A2=2.353E47、样品：混合样品1:10水溶液20卩L流动相的比例为：高纯水：10%乙腈：90%流速:1.00ml/min悚宙时问[min )H 一 ■1 (1)[mi nJJnAUJIl峰面稅 % 1I0.^31 1 1&V 1 0.0€O5 1II0.5^94 21 .144 W 0. 12OC 2673.7602S 31-J.7Q2C041.6740 3 1.329 VB 0.10022315.75099 344.7054136.0939 4 1.115 BV7 左52TD0.1193 S 2 . J20 EVa. 072S20Z .ODOC5 H .9542 € 2.412□ - 3641 J24 P U3B24 17.911846e £D92计算分离度和塔板数R i2=1.680 R 23=9.123n DMP =1.454E3 n DEP =2.815E3 n DBF =1.353E4根据上述结果我们可以发现， DMP 和DEP 的分离度比DEP 和DBP 的分离度要小。

比较结果4和5可以发现，使用乙腈的保留时间较甲醇短，这说明洗脱能力乙腈 ＞甲醇。

但是使用甲醇的分离度较使用乙腈的分离度高。

比较结果5和7可以发现，增加二元流动相中乙腈的比例， 会使得保留时间缩短， 但由于对DEP 和DBP 的影响要大于对 DMP 的影响，因此 DMP 和DEP 的峰发生了重叠，导致分离度 下降比较结果5和6可以发现, 加。