#论著#孕妇乙肝免疫球蛋白被动免疫阻断HBV母婴垂直传播作用机理的研究刘海英1,马玉燕1,崔保霞1,戴笙1,杨洁2(1.山东大学齐鲁医院妇产科,济南250012;2.武警山东总队医院)=摘要>目的:研究HB V阳性孕妇孕期应用乙肝免疫球蛋白(HBI G)预防HB V宫内感染的作用机理。
方法:将78例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇分为两组:预防组30例,于孕28、32、36周肌肉注射HBIG3次,每次200I U;对照组48例,只随访查体不用药。
检测母儿血清乙肝标志物(HB V M)和细胞因子IFN-C,IL-12,I L-6水平用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),测定HB V DNA含量用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术。
结果:78例HB-sAg阳性孕妇分娩的新生儿宫内感染10例,宫内感染率为12.82%.HBIG预防组孕妇的胎儿HB V感染率显著低于对照组(P<0.05);预防组新生儿脐血清抗-HBs检出率显著高于对照组(P<0.001);预防组孕妇血清中I FN-C,I L-12水平显著高于对照组(P<0.05), I L-6水平、HB V DNA含量则显著低于对照组(P<0.05)。
结论:孕妇HBI G被动免疫可有效阻断HBV母婴垂直传播。
=关键词>肝炎病毒,乙型;疾病传播,垂直;免疫球蛋白类中图分类号:R512.6+2文献标识码A文章编号:1004-7379(2002)02-0128-03Study on the mechanism of passive immunization of hepatitis B immunoglobulin blocking the hepatitis B virus to the materna-l infantile vertical transmission action.Liu Haiying,Ma Yuyan,Cui Bao xia,et al.Department o f Obstetrics and Gynecology o f Qilu Hos pital o f Shandong University,Jinan,250012=Abstract>Objective:To study on the mechanism of passive immunization with hepatitis B immunoglobulin(HBI G)on the prevention of HB V intrauterine infection.Methods:78cases of HB-sAg positive pregnant women were divided into two groups.In the prophylaxis group,30cases were injected with HBIG at28,32,36week during pregnancy(200IU per time).In the control group, 48cases were followed-up without injec tion of HBIG.B y using diantibody sandwich enzyme linked immunosorbant assay(DAS-E LISA)and fluorescence quantitative polymerase chain reaction(FQ-PC R),the HBV marker(HB V M),ac tivities of IFN-C,IL-12,I L-6and HB V DNA load in the blood samples of mothers and their neonates were tested respectively.Results:The incidence of HBsAg positive pregnant women.s intrauterine infection was12.82%(10/78).In HBI G prophyla xis group,the vertical transmission incidence of the newborns was lower than those in control group(P <0.05).The detection rate of ant-i HBs of prophylaxis group was significantly higher than those in control group(P<0.001).In the pre gnant women of the prophylaxis group,activities of IFN-C and I L-12were significantly higher than those in control group,but the I L-6activity and HBV DNA load of the for mer group were lower than those of control group(P<0.05).Conclusions:Passive im-munization with HBI G of pregnant woman can block materna-l infantile vertical transmission of HB V infection effectively.=Key words>Hepatitis B virus;Disease transmission,vertical;Immunoglobulins母婴垂直传播是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的重要途径,也是人群中大量HBV 慢性携带者形成的重要原因。
寻找有效阻断HBV 母婴垂直传播的预防措施已成为世界上控制乃至消灭乙肝的关键性课题。
HB V阳性孕妇孕期肌注乙肝免疫球蛋白(hepatitis B immunoglobulin,HBIG)可128现代妇产科进展2002年3月第11卷第2期Prog Obstet Gynecol,M ar.2002,Vol.11,No.2有效地预防HBV母婴垂直传播,但其作用机理尚不明确。
本研究测定了78例HBsAg阳性孕产妇外周静脉血清乙肝标志物(hepatitis B markers,HBV M)、HBV DNA含量和细胞因子干扰素-C(I FN-C)、白细胞介素-12(IL-12)、IL-6水平,并比较了30例HBsAg阳性孕妇孕期应用HBI G治疗前后外周血HBV DNA 含量的变化。
以探讨HBV阳性孕妇孕期应用HBIG 治疗预防HB V宫内感染的分子生物学作用机理。
1资料与方法1.1研究对象将2000年10月至2001年9月于山东大学齐鲁医院及济南市妇幼保健院门诊行产前检查、随访和分娩的HBs Ag阳性孕妇78例随机分为两组:预防组30例,于孕28、32、36周肌肉注射HBIG(HBIG为成都蜀阳制药厂产)3次,每次肌注200IU;对照组40例,只随访查体不用药。
所选病例孕期均无先兆流产或先兆早产及妊高征史,无肝炎史、症状或体征,肝功能正常,两组孕妇年龄、孕产式、分娩时胎龄、分娩方式差异均无显著性。
其丈夫均排除携带HBV。
78例孕妇共分娩新生儿78名。
1.2方法1.2.1标本采集及处理(1)于孕28周前采集2组孕妇外周肘静脉血各2ml,注入有盖消毒普通试管,离心前置4e冰箱保存,6h内以3000r/min离心15min,分离血清检测HBV M 及HB V DNA含量;分娩时采孕妇外周肘静脉血2ml,用前法离心后取部分血清测定HBV DNA含量,另一部分-80e冻存,待一并检测IFN-C,IL-12,IL-6水平;(2)新生儿血标本的采集:分娩时在无菌条件下留取脐静脉血2ml,用前法分离血清定量检测HB V M及HBV DNA。
1.2.2检测方法(1)乙肝5项指标的测定:采用双抗夹心ELIS A法,试剂盒购自厦门泰伦生物工程有限公司。
检测仪器为美国DENLEY自动酶标洗板机、BIO-RAD450型酶标仪。
操作步骤及结果判定按照说明书;(2)HB V DNA定量检测采用荧光定量PCR法,试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心提供。
标本的HBV DNA含量以copy/ml表示;(3)IFN-C,IL-12,IL-6水平的测定:均采用双抗夹心ELISA法。
试剂盒为美国TPI公司原装进口产品。
W-4自动洗板机为芬兰Labsystem公司产品,CB372酶标仪为美国DYNEX公司生产。
操作步骤按说明书进行。
1.3新生儿HBV宫内感染定义新生儿脐血清HBsAg,HBV DNA任一项阳性即诊断为宫内感染。
1.4统计学处理采用t检验,V2检验。
2结果2.1预防组与对照组新生儿宫内感染率78例HBsAg孕妇所分娩的新生儿宫内HB V感染10例,宫内感染率为12.82%。
孕期应用HBIG可降低胎儿HB V感染率,孕妇HBIG预防组胎儿HBV感染率显著低于对照组,差异有显著性(OR= 6.69,P< 0.05)。
见表1。
表1HBIG预防组与对照组胎儿宫内感染率比较组别n胎儿宫内感染n%OR95%CI预防组301 3.33 6.69 1.02~43.80对照组48918.75P<0.052.2新生儿脐血清抗-HBs检出率新生儿脐血清抗-HBs检出率与孕妇应用HBIG预防呈相关性,预防组新生儿脐血清抗-HBs检出率显著高于对照组,差异有高度显著性(OR=23.5,P<0.001)。
见表2。
表2新生儿脐血清抗-HBs检出率比较组别n抗-HBsn%OR95%CI预防组302073.3323.5 6.52~84.67对照组481* 2.08*此1例新生儿的母亲血清HBsAg和抗-HBs双阳性2.3HBIG预防治疗对孕妇血清中IFN-C,IL-12,IL-6水平及HB V DNA含量的影响预防组孕妇HBIG 治疗前后血清中HB V DNA含量的几何均数分别为7.11?0.43,5.21?0.25,差异有显著性(P<0.05);预防组孕妇IFN-C,IL-12水平显著高于对照组,IL-6水平,HB V DNA含量则显著低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。
见表3。
表3HBIG治疗前后孕妇血清中IFN-C,IL-12,IL-6水平(Q/pg#mL-1)及HBV DNA含量比较( x?s)组别n IFN-C IL-12IL-6HB V DNA含量*预防组30952.21?81.19721.15?30.71515.33?40.09 5.31?0.42对照组30612.05?41.23489.15?20.04753.02?46.337.01?0.6 *HBV DNA含量是指样本的几何均数3讨论新生儿接种乙肝疫苗(HB vaccine)阻断HB V母婴传播的作用,已被充分肯定,但仍有10%~20%的母婴传播阻断失败,宫内感染是主要原因。