重组抗IL-1R人源化抗体制备思路:
1.制备生产高亲和力的抗IL-1R鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞株;→
2.杂交瘤细胞总RNA提取,用RT-PCR 技术克隆鼠源单抗可变区基因;→
3.IL-1R鼠源单克隆抗体可变区氨基酸序列的分析;→
4.IL-1R鼠源单克隆抗体相应可变区片段(Fv)的模型构建;→
5.人抗体接纳体构架氨基酸序列的分析和选择;→
6.人源化抗体的设计和实际构建;
(设计、构建策略:
①模板替换,使用与鼠对应部分有较大同源性的人FR替换鼠FR;
②表面重塑,对鼠CDR和FR表面残基进行镶饰或重塑,使类似于人抗体CDR
的轮廓或人FR的型式;
③补偿变换,对起关键作用的残基进行改变,以补偿完全的CDR移植;
④定位保留,人源化单抗以人FR保守序列为模板,但保留了鼠源单抗可变
区中参与抗原结合的氨基酸残基,包括CDR和FR中的一些关键残基;)→
7.将构建的抗体重轻链基因电转化到CHO细胞中,制备获得抗IL-1R重组抗体;
8.通过体外和/或体内测定方式证实制备抗体具有高亲和力及高特异性;
9.获得产生抗IL-1R人源化抗体的单克隆细胞株。