细菌培养基
100mg/ml卡那霉素(sigma):取100mg定容至1ml,用0.22um微孔滤膜过滤除菌。
常以10-50ug/ml为工作浓度,100ug/ml用于培养细胞的杀菌。
IPTG:1g溶于5ml
引物稀释:干粉离心后根据管体所注明的量溶于灭菌去离子水中,制成浓度为100 μmol/L的贮存液,再将引物贮存液稀释10倍后使用。
PEG6000:如50%PEG6000,取50gPEG6000固体,加适量水用搅拌器搅拌,定容
至100ml。
DEPC水:剧毒,致癌,通风厨中操作,戴好口罩手套。
1mlDEPC原液+999ml二蒸水,振荡过夜至溶解。
可以重复使用。
75%乙醇:用于DNA、RNA:需用DEPC水配制,DEPC水高压灭菌去DEPC 25ml+
75ml 无水乙醇;普通:用天平称量,水比重为1,无水乙醇比重为0.785。
杀菌:95%医用乙醇加水,用酒精计配制。
0.1M CaCl2:0.22μm微孔滤膜过滤除菌
组培用6-BA(索莱宝,园艺所用上海致化):取0.025g,加入适量水,滴入3-4滴NaOH(不要加太多)使固体粉末溶解,定容至25ml。
组培用NAA:1mg/ml。
组培用NaOH:10g定容至100ml。
提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH8.0),10mM
EDTA(pH8.0) (如配制50ml,则需葡萄糖0.4504g、1M Tris-HCl(pH8.0)1.25ml、0.5M EDTA 1ml)。
高压蒸汽灭菌15min,4℃保存。
提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅱ:0.2N NaOH,1%(m/v)SDS。
(如配制1ml,则需2N NaOH 100,10% SDS 100μl,定容至1ml)。
现用现配,室温使用。
提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅲ:100ml中有5M乙酸甲60.0ml,冰乙酸11.5ml,H2O 28.5ml。
配制50ml时需5M乙酸甲30.0ml(14.721g定容至30ml),冰乙酸5.75ml,H2O14.25ml。
保存于4℃,用时置于冰浴中提前预冷。