Mix
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结果计算
斑点至原点距离
Rf = 溶剂前缘至原点距离
小心量出斑点中心至原点中心距离， 再量出原点中心至溶剂前沿的距离，计算 出它们的 Ｒｆ值。 根据Ｒｆ值，鉴定出混合样品中氨基 酸的种类，并绘出层析图谱。
09年秋季学期 生物化学与分子生物学实验教学中心
The scan of TLC plate (silica gel G) with 10 essential oils(精油）
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实验材料





吸附剂：硅胶 粘合剂： 0.5%的羧甲基纤维素钠 氨基酸的异丙醇溶液 丙氨酸、精氨酸、甘氨酸 展开-显色剂（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液） 分析样品：氨基酸混合液
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器材


层析板、尺子、铅笔 烧杯、量筒 喷雾器、吹风机 毛细管、层析缸 药匙 烘烤箱
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操作步骤—
点样
1、位置：用铅笔距底边 2cm水平线上均匀确定4个 点。每个样品间相距1cm。 2、用毛细管分别吸取氨 基酸溶液，轻轻接触薄层 表面点样。 3、加样后原点扩散直径 不超过2mm。 4、待点样点干后再重复 点一次。
09年秋季学期
2cm
Ala Arg Gly Mix

硅胶的吸附力与含水量的问题
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
吸附实验中吸附剂的选择根据
氨基酸纸层析，两者有何区别

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注意事项
1.切勿用手直接接触薄层板面。 2.如果样品液太稀，需要重复点样时，点样过程 中必须在第一滴样品干后再点第二滴。 3.样品量太少，有的成分不易显示；样品量太多， 易造成斑点过大，互相交叉或拖尾。
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复习思考题
如何分离鉴定氨基酸混合液？
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氨基酸的薄层层析
(Thin layer chromatography of amino acids)
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实验目的

掌握薄层层析法的一般原理。 掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。 掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离 的物质（即氨基酸混合液）。
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层析法的分类

气相层析（以气体为流动相的层析法） 液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生 物化学领域里常用的方法） 1.吸附层析：薄层吸附层析、吸附柱层析 2.分配层析：纸层析、柱层析、薄层层析 3.离子交换层析 4.凝胶层析：柱层析、薄膜层析 5.亲和层析
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实验原理
2. 氨基酸与茚三酮的显色反应 茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热 时被还原，此产物与氨基酸加热分解产生的
氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成
蓝紫色化合物而使氨基酸斑点显色。
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茚三酮
水合茚三酮
Ninhydrin (2,2-Dihydroxyindane1,3-dione)
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实验原理
1.薄层层析法是色谱分析技术的一种
一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作 为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时， 由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基 酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合 氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以 彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反 复进行，而将样品各组分分离开来）
1cm
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操作步骤—
展层、显色
将薄层板点样端浸入展 层-显色剂，展层-显色剂液 面应低于点样线。盖好层析 缸盖，上行展层。当展层剂 前沿离薄板顶端2cm时，停 止展层，取出薄板，用铅笔 描出溶剂前沿界线，用热风 吹干或在85℃下烘干，即可 显出各层斑点。
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Ala Arg Gly
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操作步骤—
薄层板的制备
1、调浆 称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素 钠8毫升，调成均匀的糊状。
2、涂布 取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。
3、干燥 将玻璃板水平放置，室温下自然凉干。 4、活化 70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板 面温度下降至不烫手时取出。
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层析技术


概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差 别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、 分子极性等）使各组分在两相中的分布不同， 从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而 达到分离的目的。 特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的 物质。不仅可用于少量物质的分离纯分，也可 用于大量物质的分离纯化和制备。
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茚三酮反应（ninhydrin reaction)
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实验原理
3.混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对 迁移率—Rf值（rate of flow）来表示。 层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液 前沿的距离之比为Rf值。 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故 移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来 鉴定被分离的物质。