>90
>90
>90
0
0
0
25
0
>90
Pme I
GTTTAAAC GGTTTAAACC GGGTTTAAACCC AGCTTTGTTTAAACGGCGCGCCGG
0
0
0
25
0
50
75
>90
Pst I
GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
0
0
>90
>90
75
>90
75
>90
0
0
10
25
10
75
0
0
25
75
50
>90
>90
>90
注释：
1．如果要加在序列的 5’端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的
5’端加上相应的碱基（黑色），相同如果要在 3’端加保护碱基，就
在酶切位点识别碱基序列（红色）的 3’端加上相应的碱基（黑
色）。
2．切割率：正确识别并酶切的效率
CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC
GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA
GGGT(A/T)ACCC
AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
0
0
25
50
25
>90
0
0
0
0
>90
>90
50
50
EcoR I Hae III Hind III Kpn I Mlu I Nco I Nde I
Nhe I Not I
Nsi I Pac I
GGAATTCC CGGAATTCCG CCGGAATTCCGG
GGGGCCCC AGCGGCCGCT TTGCGGCCGCAA
CATCGATG GATCGATC CCATCGATGG CCCATCGATGGG
切割率%
2 hr 20 hr
0
0
0
0
0
0
0
0
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
50
>90
>90
>90
>90
>90
10
25
>90
>90
>90
>90
0
0
75
>90
25
>90
0
0
0
0
50
>90
0
10
寡核苷酸序列
GGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG
CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG
GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA
CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA
CGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCGCG
>90
>90
>90
>90
>90
>90
Xba I Xho I Xma I
CTCTAGAG GCTCTAGAGC TGCTCTAGAGCA CTAGTCTAGACTAG
CCTCGAGG CCCTCGAGGG CCGCTCGAGCGG
CCCCGGGG CCCCCGGGGG CCCCCCGGGGGG TCCCCCCGGGGGGA
0
0
10
10
>90
>90
>90
>90
0
0
Pvu I
CCGATCGG ATCGATCGAT TCGCGATCGCGA
0
0
10
25
0
10
Sac I
CGAGCTCG
10
10
Sac II
GCCGCGGC TCCCCGCGGGGA
0
0
50
>90
Sal I
GTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC
0
10
0
10
10
50
>90
>90
Spe I
GACTAGTC GGACTAGTCC CGGACTAGTCCG CTAGACTAGTCTAG
10
>90
10
>90
0
50
0
50
Sph I
GGCATGCC CATGCATGCATG ACATGCATGCATGT
0
0
0
25
10
50
Stu I
AAGGCCTT GAAGGCCTTC AAAAGGCCTTTT
TTAATTAA GTTAATTAAC CCTTAATTAAGG
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
0
0
0
0
10
75
0
0
>90
>90
>90
>90
0
0
25
50
0
0
50
75
0
0
0
0
0
0
0
075>源自075>90
0
0
10
25
10
50
0
0
10
10
10
10
25
90
25
>90
10
CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG
GGGTACCC GGGGTACCCC CGGGGTACCCCG
GACGCGTC CGACGCGTCG
CCCATGGG CATGCCATGGCATG
CCATATGG CCCATATGGG CGCCATATGGCG GGGTTTCATATGAAACCC GGAATTCCATATGGAATTCC GGGAATTCCATATGGAATTCCC
NEB 保护碱基各种酶切 位点保护碱基
19882）
集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-
酶 Acc I Afl III Asc I Ava I BamH I Bgl II BssH II BstE II BstX I Cla I
PCR 设计引物时酶切位点的保护
0
0
GCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCGG
10
50
ACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCGGAA 10
75
Sca I
GAGTACTC AAAAGTACTTTT
10
25
75
75
Sma I
CCCGGG CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA
GGCTAGCC CGGCTAGCCG CTAGCTAGCTAG
TTGCGGCCGCAA ATTTGCGGCCGCTTTA AAATATGCGGCCGCTATAAA ATAAGAATGCGGCCGCTAAACTAT AAGGAAAAAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA
TGCATGCATGCA CCAATGCATTGGTTCTGCAGTT
3。加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基。