导入检测 转录检测
翻译检测
DNA分子杂交技术 分子杂交技术 抗体-抗原检测
抗性检测、功能活性比较等
基因工程的基本操作程序
获取目的基因
构建表达载体 导入受体细胞 目的基因检测与鉴定
发光基因
含发光基因 的重组质粒
课堂评价
当堂巩固·知识运用·举一反三
1、据图回答：
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用H_i_n_d_Ⅲ__和__B_a_m_H_Ⅰ__限制
酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。
(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是
___A__(填字母代号)。
A．启动子
B．tetR
C．复制原点
D．ampR
(3)过程①可采用的操作方法是_显__微__注__射_ (4)该过程成功的标志是__牛__乳__汁__中__含__有__人__乳__铁__蛋__白______。
2.（山东理综）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功， 既要用放射性同位素标记的__耐__盐_基__因_（__目_的__基_因__）__作探针 进行分子杂交检测．又要用___一__定_浓__度_的__盐_水__浇__灌_____
（__移_植__到_盐__碱_地__中_）_方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性 。3.（山东理综）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺 生物反应器，需将目的的基因导入牛受精卵，最常用的 导入方法是__显__微__注__射_法____；获得转基因母牛后，如果 牛__奶_中__含_有__人_类__白_细__胞__介_素__（_或__牛_乳__腺_细__胞_已__合_成__人_类__白__细_胞__介_素） 即说明目的基因已经表达。
RNA
翻 译
蛋白质
导入检测 转录检测 翻
检 测
四、目的基因检测与鉴定
DNA
转 录
RNA
翻 译
蛋白质
导入检测
DNA分子杂交技术
原理：碱基互补配对原则
DNA分子杂交技术
放射性元素标记
形成杂交带
基因探针 非目的基因
四、目的基因检测与鉴定
DNA
转 录
RNA
翻 译
蛋白质
1、为什么要构建基因表达载体？ 2、构建好的基因表达载体包括哪些结构？ 3、启动子有什么作用？ 4、标记基因有什么作用？
二、基因表达载体的构建
【基本过程质】粒
限制酶 目的基因
DNA连接酶
（限时5分钟）
利用所给的质粒和含发光基因的片段，构建 发光基因表达载体
1、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只 用一种酶切割会出现什么弊端？ 2、能不能用两种不同的酶切割？ 3、请讨论并制定一个最佳构建方案
常用方法
农杆菌转化法
显微注射技术
Ca2+ 处 理 形 成 感受态细胞
受体细胞 体细胞
受精卵
原核细胞
三农、杆菌目转的化法基：因导入受体细胞 构建基因表达载体
发光基因
原理：
1、农杆菌对植物具有感染能力。 2、T-DNA易整合到受体细胞的染 色体DNA上。
导入植物细胞
四、目的基因检测与鉴定
DNA
转 录
【小结】
构建基因表达载体的注意事项：
1、要使用同种限制酶切割，使质粒和载
体形成相同的粘性末端。
2、目的基因应插在启动子和终止子之间
3、防止质粒和载体反向连接
三、导入受体细胞 【课前预习成果展示】 生物种类 植物细胞 动物细胞 常用方法 受体细胞
微生物细胞
三、导入受体细胞
生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞
【展示分享】
1、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只 用一种酶切割会出现什么弊端？ 2、能不能用两种不同的酶切割？ 3、请讨论并制定一个最佳构建方案
各共同体成员要积极参与、协同合作。要确定好展示 者，展示者声音要洪亮，语言表达要简洁、清晰。
双酶切的优点：
1.防止目的基因与运载体反向连接 2.防止运载体和目的基因的自身环化
会自己发光的转基因树
第二节 基因工程的基本操作程序一、获取目的基因基因 基因组大肠杆菌 部分基因
一、获取目的基因方法一：从基因中获取 方法二：利用PCR技术扩增
利用PCR技术扩增目的基因
原理： DNA双链复制 条件： 模板、 原料、 酶、 能量
引物
Taq酶
一、获取目的基因方法一：从基因中获取 方法二：利用PCR技术扩增获取 方法三：人工合成
利用PCR技术扩增目的基因
1、利用PCR技术扩增的原理是什么？
2、实现PCR技术需要什么条件？
3、利用PCR技术扩增与体内DNA复制有何区别？
（尝试从酶的角度进行分析）
【思考】
1、利用PCR技术扩增的原理是什么？
DNA双链复制
2、实现PCR技术需要什么条件？
模板、 原料、 酶、 能量
3、利用PCR技术扩增与体内DNA复制有何区别？
（尝试从酶的角度进行分析）
（1）在利用PCR技术扩增过程中是高温解旋不需要DNA 解旋酶。 （2）在复制过程中需要的是耐高温的热稳定性聚合酶 （Taq酶）
二、构建基因表达载体 （核心）
【思考】（限时2分钟）