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噬菌斑测病毒滴度


和半数致死量( LD50 ),其中以 LD50 最常用。它是指在一定时间内能使半数 实验动物 致死
的病毒量。 然而, 病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志,
例如以感染发病作指
标,则可以 半数感染量 ( ID50)测定;此外,当实验的材料是鸡胚时则用鸡胚半数致死量
( ELD50)或鸡胚半数感染量( EID50)表示;实验的材料是细胞时则用组织细胞培养半数
⑦在 病毒学 中,指用 噬菌斑 方法测得的噬菌体浓度。 噬菌体的效价(滴度)就是一毫升培
养液中所含活噬菌体的数量。
中文名:滴度
英文名: titer ;titre
同义名:效价
符号: tt
效价测定的方法:
一般应用双层琼脂平板法。 由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上, 噬菌体产生肉眼可见的
噬菌斑,因此,能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近
6. 6 弃 6 孔板内上清,快速加 2ml 上层琼脂,以防菌层干燥,静置 10-20min 使其凝固;
7. 7 将 6 孔板放入 27℃培养箱,培养 4 - 10 天;
8. 8 计数板中噬菌斑, 直至连续两天无变化, 加 1mg/ml 中性红 0.5ml ,室温孵育 2h 后计数噬菌 斑。 END 注意事项
对这些词的使用已规范化,但在不少书刊的文章中常见误用,如称效价
1 : 40 之类。
④在学反应中,指产生某一结果所需标准试剂的量。
⑤为 当量浓度 的二十分之一。在制碱与制 碳酸氢铵 中用以表示氨水的浓度。
⑥在免疫学中, 指通过 血清学 方法能显示一定反应的抗体或抗血清的最高稀释倍数;
如终点
稀释度为 1/100 ,则血清的效价(每 1ml 的血清中 抗体效价 )为 100 抗体单位。
100%(一般
偏低,因为有少数活噬菌体可能未引起感染 ),所以为了准确地表达病毒悬液的浓度 (效价或
滴度 )一般不用 病毒粒子 的绝对数目而是用噬菌斑形成单位 (Plague-forming units ,简写成
pfu) 表示。
病毒滴度
也即病毒的毒力,或毒价,衡量病毒滴度的单位有最小致死量(
MLD )、最小感染量( MID )
感染量( TCID50)表示。
4. 4 弃 6 孔板内上清,快速加入稀释好的病毒, 1ml/ 孔,复孔,室温孵育 1h。
5. 5 配置上层琼脂:加 20ml 高温灭活 FBS到 2×Grace 100ml ,25ml 2 ×Grace(含 FBS) 12.5ml
噬菌斑测病毒滴度 无菌水 12.5ml 4% agarose gel ,至预热的 100ml 无菌瓶,轻轻混匀,放入 37℃水浴锅备用;
? 病毒滴度( pfu/ml ) =1/ 稀释倍数×噬菌斑数× 1/ 每孔接种体积
滴度
噬菌斑测病毒滴度
①某一物质与一定容量的另一物质产生反应所需的量。
②所谓滴度即病毒悬液的浓度,就是指 pfu 的数值。
③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的
1 : 180 的稀释度,其滴度就是 180 。
效价是滴度的同义词。 效价即滴度, 两者通用。 当前虽然专业的化学和免疫学词典和专著中
噬菌斑测病毒滴度
杆状病毒滴度检测
实验概要 本实验介绍了检测病毒滴度的方法。 实验原理 根据噬菌斑数计算病毒滴度。 工具 / 原料
? 1. 4% agarose gel : 2g agrose 50ml 水,高压灭菌 ? 2×Grace( unsupplemented ): 9.14g 粉末( invitrogen ) 0.07gNaHCO3 H2O ,调
PH6.1,定容至 100ml ,无菌过滤 ? supplemented Grace :1×Grace 添加 3.33mg/ml Lactalbumin ,3.33mg/ml yeastolate ,
无菌过滤 ? 4. 高温灭活 FBS ? 主要设备 1. 6 孔板 2. 12ml 离心管 3. 100ml 无菌玻璃瓶 4. 无菌吸管 5. 70 ℃水浴锅 ? 实验材料 杆状病毒, SF9: 5×105cells/ml 方法 / 步骤 1. 1 无菌条件下, 2ml/ 孔细胞( 5×105cells/ml )种入 6 孔板,室温孵育 1h 使其贴壁,孵育后镜 检其贴壁程度; 2. 2 将 4% agarose gel 放入 70℃水浴锅融解, 空 100ml 无菌瓶与 2×Grace 放入 40℃水浴锅预热; 3. 3 将杆状病毒用无血清 supplemented Grace 梯度稀释: 10-1~10-8 。
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