五 初代培养（接种）
• 在无菌条件下将其切成2厘米左右带有叶芽 的小段，用镊子剪去外植体材料，按极性 方向直立迅速接种倒三角瓶的培养基中， 深约2~3mm。每个三角瓶中可接3个.为防 止褐化，接种前将一般的外植体放在1%的 Vc溶液中侵泡5分钟，再接种于诱导培养基 上。接种时三角瓶要保持倾斜，接种后要 迅速将瓶口在酒精灯上转动灼烧一边进行 消毒，然后迅速改好封口膜。
四 培养基的配制
• 选用为MS基本培养基。在培养物的不同发 育阶段分别添加不同种类和浓度的植物激 素，蔗糖3.0%，pH5.8~6.0，用约0.8%的 琼脂固化，分装后在121摄氏度条件下灭菌 20min，放置备用。其中，丛生芽诱导培养 基为MS+6-BA3.0mg/l+NAA0.5mg/l；继代 培养基为MS+6-BA3.5mg/1+NAA0.5mg/l； • 生根培养基为MS生芽有逐渐长成苗趋势时，可及时进 行继代繁殖。 • 在无菌滤纸上将丛生芽切割成几块，分别 接种于继代培养基上，每瓶2~3个芽，一般 30天后可长成高达2cm的小苗丛，取丛生 芽转接于新的继代培养基上，则可在更短 的时间内长成丛生芽，继代培养的次数越 多，从接种到长出丛生芽所需的时间越短， 但不短于7天，若不及时转接，芽苗会迅速 长高。
七 诱导生根
• 当继代培养的丛生芽长至2~3cm，具有2~3 片叶时，可将其切成单株，转接到生根培 养基中进行培养，一般1周后有根出现。
八 移栽培养
• 当生根苗在生根培养基长至5cm左右时，现 将封口膜打开，将其由无菌环境转至有菌 且温度较低的环境之中约3天，然后将苗取 出，小心用流水洗去根表面的培养基残留 物，移栽到蛭石中，适当遮荫，一星期后 即可成活，成活率达95%以上，一个月后 即可上盆。
菊花组织培养技术
一 外植体的选择
• 选用菊花的带腋芽茎段作为外植体。选取 生长健壮的嫩茎先用洗衣粉水冲洗2次，在 用自来水洗2次，以洗去表面泥土杂质为标 准。然后移至超净工作台上，用75%酒精 处理20~30秒，在用无菌水冲洗3~5次，转 入0.1%升汞溶液浸泡8~10分钟，再用无菌 水冲洗4~6次，用滤纸吸干水分，最后将材 料放入无菌的锥形瓶中封口待用。
二 器材与用具
• 超净工作台 剪刀 长柄镊子 架台 无菌滤纸 酒 精灯 火柴 标签 铅笔 棉球 废液缸 精密PH试 纸5.4~7.0 玻璃三角坪 封口膜 • 培养皿
三 药品与试剂
• MS培养基母液 激素（生长素 细胞分裂素 等）母液 有机物（琼脂 蔗糖） 无菌水 0.1%升汞 75%酒精 0.1mol NaOH.
• 最后在瓶壁上贴好标签，注明接种材料的 名称 编号和接种日期。接种完成后转入培 养室进行初代培养，培养温度22~28摄氏度， 关照强度1000~4000Lx。 • 经过7天左右，茎段开始变粗，并在其切口 周围出现少量绿颜色，质地紧密的愈伤组 织，同时腋芽开始萌动展开。经过10~15天 的培养后，腋芽伸长，并行成丛生芽，逐 渐长成苗丛。