4 3%戊二醛固定 0.5-1小时
四 实验方法
5 PH6.8 磷酸缓冲液洗 3次/10分钟 6 0.2%考马斯亮蓝R250染色 20~30分钟 7 蒸馏水洗 1-2次→装片→观察 8 制作永久切片
四 实验方法(Ⅱ)
取洋葱内皮1cm 左右
置于含PBS 液的载玻片上
湿润后，吸去PBS
加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min
植物细胞骨架的形态特征
细胞骨架观察结果 10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由
线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘 骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的 细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维 相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调节显微 镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化， 表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞 内。
实验六 植物细胞骨架的光学 显微镜观察
一 实验目的 1 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物
细胞骨架的制备方法与显微形态观察。 2 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架
染色的方法。
二 实验原理
细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状 结构，成分有微丝、微管和中间纤维。
Triton X-100可溶解抽提细胞中的蛋白质 和脂质，但不破坏细胞骨架系统。
吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB 溶液，固定30min
加PBS 洗2 次，共3min
加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min
用PBS 洗2 次，共2min，吸干
镜检并绘图 细胞骨架标本制作过程
五 作业
1 绘出植物细胞骨架微丝结构图。 2 分析和论述在光学显微镜下观察到的细
胞骨架的形态特征。 3 为什么用TritonX-100 的缓冲液处理材
料？
植物细胞骨架微丝结构图
植物细胞骨架微丝结构图
植物细胞骨架微丝结构图
植物细胞骨架微植物细胞骨架的形态特征
细胞骨架观察结果
光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如 图），细胞壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略 观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状 结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核 区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络 结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相 邻细胞的密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不 同。
戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色，光 学显微镜观察网状结构的由微丝组成的 细胞骨架。
三 实验仪器、材料和试剂
1 仪器、用具：普通光学显微镜等 2 材料：洋葱鳞茎 3 试剂：
⑴ M-缓冲液 ⑵ 6mmol/L磷酸缓冲液 ⑶ 1% Triton X-100 ⑷ 0.2%考马斯亮蓝R250
三 实验仪器、材料和试剂
3 试剂： ⑸ 3%戊二醛 ⑹ 50%、70%、95%乙醇 ⑺ 叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶
四 实验方法(Ⅰ)
1 洋葱鳞茎内表皮（1cm大小）→ 50ml烧杯（磷酸缓冲液）→下沉
2 吸去缓冲液→ 加1% Triton X-100 20~30 分钟
3 吸去Triton X-100→ M-缓冲液洗 3次/10分钟