总蛋白酶活性测定用氨苯磺胺偶氮酪蛋白为底物测定。

偶氮酪蛋白以20 mg/L的浓度溶于0.15molL /NaCI溶液。

取该液0.3mL加人含中肠酶液的0.3mL PH7.2磷酸盐反应缓冲液中反应。

在30℃反应2h,加人0.6mL的2 0%(重量/体积)三氯乙酸终止反应。

反应混合物在11200 x g、4℃下离心15min后,取上清液,在366nm测光吸收值。

反应混合物1个吸收单位的变化定义为1个偶氮酪蛋白单位。

类胰蛋白酶活力测定采用两种专性底物:BAPN A和TAME。

BA PNA以2 0mgm /L溶于二甲基亚矾,取40ul 加入含中肠酶液的1.5mL PH7.2的磷酸盐L反应缓冲液中,反应20min后,加人0.5mL30%(体积/体积)乙酸终止反应,在405nm测光吸收值。

TAME以2mmol/L 溶于0.15mol/L NaCI溶液中。

反应缓冲液为pH 7.2的磷酸盐缓冲液，其余反应步骤同强碱性类胰蛋白酶活性测定，最后在248 nm测定吸光值.
淀粉酶活性的测定: 主要按照3，5- 二硝基水杨酸法(张桂芬等，2008)进行，具体的操作步骤为: 1) 标准曲线的制作: 配制浓度为1．0 mg/mL
的麦芽糖标准溶液10 mL，测定时分别稀释至0.2，0.4,0.5,0.6, 0.7，0.8 和1.0 mg/mL。

依次取上述溶液10 μL 分别移入0．2 mL PCR 管，每管加入10 μL 显色剂(3，5- 二硝基水杨酸试剂)，置沸水浴中煮沸5 min，冰浴冷却后加入蒸馏水80 μL。

以微量移液器取混合溶液90 μL 移入酶标板(美国Costor)，立即于490 nm 处读取OD 值，并确定OD值与麦芽糖含量之间的对应关系; 2) 样品酶液的测定: 取5 μL 浓度为1 % 的淀粉溶液移入0．2 mLPCR 管中，加入5 μL 待测样本酶液，混合均匀，于25℃温浴3 min 后加10 μL 显色剂(3，5- 二硝基水杨酸试剂)终止反应。

其他操作步骤及OD 值的测定方法同标
准曲线。

此时所测得的麦芽糖量为淀粉在淀粉酶的作用下所形成的麦芽糖。

淀粉酶活性以μg(麦芽糖) /mg pro·min 表示。

蛋白含量测定:参照Bradford(1976)考马斯亮蓝(G- 250)方法，采用3 mL 的反应体系。

对照缓冲液(pH 7.2)500 μL，考马斯亮蓝2．5 mL。

以牛血清白蛋白作标准曲线。

肪酶活性测定：依次加入p H 7.2 磷酸盐缓冲溶液 2.4 mL, 橄榄油1.0mL, 并于37水浴锅中磁力搅拌预热5 m in, 再加入中肠消化液0.16 mL, 磁力搅拌10min , 立即加入苯510 mL, 继续搅拌2 min ,终止反应,转移至离心管, 4 000 r min/L 离心10 m in ,取上层有机相4.0 mL于锥型瓶中, 加1.0 mL 显色剂( 5 % 醋酸铜溶液用吡啶调节至p H 6.1), 磁力搅拌3m in , 4000 r/m in- 1 离心10 m in , 取上层溶液于710 nm 处测定吸光度。

以pH 7.2磷酸缓冲溶液取代中肠消化液作为对照。

在上述实验条件下, 以每分钟水解橄榄油产生1 L/mol油酸所需的酶量定为1个酶活力单位。

每组设3个重复。