为了减少柱外因素对峰宽的影响，必须尽量减
小驻外死体积。如采用进样阀进样，使用“零
死体积接头”连接管路各部件，并尽可能使用
内腔体积小的检测器。
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第三节 高效液相色谱法的主要类型
❖ 一、 液-固吸附色谱法 ❖ 二、 化学键合相色谱法 ❖ 三、 流动相的要求和洗脱方式
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第三节 高效液相色谱法的主要类型
则均匀的固定相，(键合相)传质阻抗小，柱效高， 分离效率高； ❖ 高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最 小检测限可达10 -9g，而荧光检测器最小检测限可 达10 -12g。
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二、 高效液相色谱法与气相色谱法的比较
不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用 范围广；
可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择 性有很大作用，选择性高；
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一、 液-固吸附色谱法
(一) 液-固吸附色谱法的固定相
常用的有硅胶、氧化铝及高分子多孔微球(有机胶)，其 次还有分子筛及聚酰胺等
❖ 1.硅胶
表孔硅胶、全多孔硅胶、堆积硅珠
❖ (1)全多孔硅胶 优点：表面积大，容量大
❖
缺点：孔径深，传质阻力大
❖ 无定形全多孔硅胶(YWG)：粒径5～10um，理论 塔板数每米2～5万，价格便宜、载样量大，但渗 透性差
第十四章 高效液相色谱法
high performance liquid chromatography
HPLC
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第十四章 高效液相色谱法
❖ 第一节 概述 ❖ 第二节 基本原理 ❖ 第三节 高效液相色谱法的主要类型 ❖ 第四节 高效液相色谱仪 ❖ 第五节 高效液相色谱法的应用
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❖ 球形全多孔硅胶(YWG)：粒径3～10um，理论塔 板数每米8万，涡流扩散项小，渗透性好。
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(2)堆积硅珠(YQG)
由二氧化硅溶胶加凝结剂聚合而成。粒径 3～5um，理论塔板数每米8万，传质阻力 小，柱容量大，是一种好的高效填料
❖ 2.高分子多孔微球(YSG)
又称有机胶，表面为芳烃官能团，由苯乙 烯与二乙烯苯交联而成
❖ （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用 紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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二、 化学键合相色谱法
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选择流动相时应注意的几个问题：
❖ （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂 质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。
❖ （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降 或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏 氧化铝固定相等。
❖ （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产 生沉淀并在柱中沉积。
用于分离芳烃、杂环、甾体、生物碱、脂 溶性维生素、酚、醛、醚等。柱效低，但 选择性好，峰形好。
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(二) 液-固吸附色谱法的流动相
❖ 常用溶剂:
己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。
❖ 流动相的选择
应重点考虑溶剂的极性
❖溶剂的极性强弱可用Snyder提出的溶剂极 性参数ε0来表示。ε0为溶剂分子在单位吸附 剂表面的吸附自由能。ε0越大，说明溶剂的 极性越强，洗脱能力就越强。
❖ 分配色谱法(partition hromatography) ❖ 吸附色谱法(adsorption chromatography) ❖ 离子交换色谱法（IEC） ❖ 空间排阻色谱法（SEC） ❖ 化学键合相色谱法(bonded phase
chromatography. BPC) ❖ 胶束色谱法(micellar chromatography；MC)
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类型
❖ 分类
流动相按组成不同可分为单组分和多组分； 按极性可分为极性、弱极性、非极性； 按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。
❖ 在液-固吸附色谱法中，常常采用二元或二元以 上的混合溶剂系统
这样可以找到适合强度的溶剂系统， 而且还可以保持溶剂的粘度以降低柱压 和提高柱效，还可以提高分离的选择性
一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。
❖ 特点：
高压、高效、高速、高灵敏度、适用范围广
❖ 适用：
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分
离分析。
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第二节 基本原理
❖ 一、 柱内展宽 ❖ 二、 柱外展宽
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高效液相色谱法对基本概念和理论
❖ 如塔板理论、速率理论、保留值与分配 系数的关系、分离度等与气相色谱法基 本一致，
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第一节 概述
❖ 高效液相色谱法（HPLC）
－－以高压液体为流动相的液相柱色谱法。 又称为高压液相色谱法；高速液相色谱法。
❖ 一、 高效液相色谱法与经典液相色谱法 的比较
❖ 二、 高效液相色谱法与气相色谱法的比 较
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一、 高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较
❖ 经典液相色谱法为基础， ❖ 引入气相色谱法的理论和实验技术， ❖ 高压输送流动相，流速快，分析速度快； ❖ 高效固定相，颗粒极细（一般为10μm以下）、规
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根据固定相和流动相相对极性的大小
正相液液分配色谱法(normal-phase liquid- liquid partitionn chromatography, NLLC)
反相液液分配色谱法(reversed-phase liquid- liquid partition chromatography ,RLLC)
❖ 依据速率理论（即Van Deemter 方程） H=A+B/ u +Cu 来讨论
与GC同（略）
（一）涡流扩散项A （二）纵向扩散项B/u （三）传质阻力项
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二、 柱外展宽
❖ 柱外展宽—色谱柱外各种因素引起的峰展 宽。
柱外因素主要指低劣的进样技术和包括进样器 连接管、接头、检测器在内的管路体积（死体 积）。死体积越大，对色谱峰展宽影响越大。
由于流动相分别为液体和气体，两者的扩 散系数和粘度差别较大，因而在应用色谱 基本理论时，必须考虑本身的特点。
❖ 其中最重要的是速率理论中，各种动力 学因素对高效液相色谱峰展宽带影响与 气相色谱中有所不同。
这种影2响020年可6月分为柱内因素和柱外因素二类7
一、 柱内展宽——是由色谱柱内各种 因素所引起的色谱峰扩展，