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戊二醛固定液的配制

Step 1:
0.2M磷酸缓冲液的配制:
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磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O) 2.6克
磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O) 29克
双蒸馏水加至500毫升
pH调至7.4
Step 2:
戊二醛固定液的配制:
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25% 戊二醛1ml
双蒸馏水4ml
0.2mol/L磷酸缓冲液5ml
戊二醛最终浓度 2.5%
pH值7.3-7.4
戊二醛固定剂的配方:
(a)磷酸缓冲液的配方:
A液:0.2M磷酸氢二钠贮备液:
Na2HPO4·9H2O 17.81 克或:Na2HPO4·7H2O 26.83 克
或:Na2HPO4·7H2O 35.82克
加双蒸水至500毫升
B 液:0.2M磷酸二氢钠贮备液
NaH2PO4·H2O 13.8 克
或:NaH2PO4·2H2O 15.61 克
加双蒸水至600毫升
使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。

(PH7.4)(b) 2.5﹪戊二醛固定液的配方:
0.2M磷酸缓冲液50毫升
25﹪戊二醛溶液10毫升
加双蒸水至100毫升
具体步骤如下:
离心收集细胞,PBS漂洗两遍,双醛固定(2%多聚甲醛+2.5%戊二醛。

双醛固定对免疫电镜更加适合。

)30min,PBS漂洗两遍,1%锇酸固定1h,PBS清洗3遍,用小的样品勺取出一点标本,置包埋板或小的离心管中,然后常规梯度脱水,浸透,包埋。

把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察。

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