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分 析 仪 器 2009 年第 5 期
475 - 482 7 Kappenstein , O , Klaff ke H. Mycotoxin Res , 2005 (21) ,
3- 6 8 郑 荣 , 毛 丹 , 张 道 广. 中 国 卫 生 检 验 杂 志. 2008 ( 18) :
2266 - 2267
收稿日期 : 2009 - 04 - 08
2 实验部分
21 1 仪器与试剂 Agilent 1200 高 效 液 相 色 谱 仪 , 6410 Triple
Quad L C/ MS ,固相萃取装置 。 甲醇 、乙腈为色谱纯 ; 丙酮 、正己烷为分析纯 ;
Millipore 超纯水 ;玉米赤霉烯酮 ,纯度 ≥98 % ( Sig2 ma 公司) ;固相萃取小柱 N H2 (500mg/ 6mL ,振翔公 司) ,在使用前依次用乙酸乙酯 5mL 、正己烷 5mL 进行活化 。 21 2 液相色谱条件
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仪器应用
液相色谱 - 串联质谱法测定 食用油中的玉米赤霉烯酮
李 鹏 董广彬 顾鑫荣 李肖斐 潘 炜
(大连市产品质量监督检验所 , 大连 , 116021)
摘 要 建立了固相萃取柱净化 - 液相色谱/ 串联质谱法测定食用植物油中玉米赤霉烯酮的方法 。样品经正 己烷稀释后 ,过氨基柱进行富集和净化 ,用液相色谱/ 串联质谱法进行分析 。质谱法采用负离子扫描模式和多反应 监测技术 。在 1. 0～100. 0 ng/ mL 范围内 ,被测物浓度与峰面积呈线性关系 ( r = 0. 998 ) ;在添加质量浓度为 1. 0 ～100. 0μg/ kg 的玉米赤霉烯酮时 ,回收率 ≥90. 0 % ,相对标准偏差 < 3. 5 % ,检出限为 1. 0μg/ kg 。该法简便 、快速 、 准确 ,可用于食用油中玉米赤霉烯酮的测定 。
A met hod of high performance liquid chro matograp hy2tandem mass spect ro met ry ( H PL C2MS/ MS) wit h elect ro sp ray io nizatio n is p ropo sed for determining zearaleno ne in edible vegetable oil s. The oil sample was diluted wit h hexane , t hen co ncent rated and p urified wit h an N H2 cart ridge. The elute was analyzed by H PL C2MS/ MS in negative io nizatio n mode and wit h multireactio n mo nito ring technique. The analyte co n2 cent ratio n and t he peak area exhibited linear relatio nship in t he range of 1. 0～100. 0ng/ mL ( r = 0. 998) , t he recovery was ≥90. 0 % , and t he RSD was < 3. 5 % wit h t he detectio n limit of 1. 0ng/ kg. The met hod is simple , rapid , and accurate.
玉米赤霉烯酮检测方法主要有液相色谱法[3] , 气相色谱法[4 ] ,薄层色谱法[5 ] 等 ,大多数方法用于饲 料 、谷物中毒素的测定 ,由于食用油性质的特殊性 , 一种有效的前处理方法成为关键 。国外有报道采用
液液萃取[6 ] 和 GPC[7 ] 对样品进行净化 ,但液液萃取 的重复性及回收率都值得商榷 ,而且 GPC 净化使用 的溶剂量较大 ,不适于在我国推广使用 。本实验采 用固相萃取柱对食用油进行净化 ,简化了样品的前 处理过程 ,方法具有简便快速 ,灵敏准确的优点 ,用 于实际样品测定 ,获得了满意的结果 。
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备样品 ,回收率及精密度试验结果见表 1 。结果显 示 ,空白样品中添加 1. 0～100μg/ kg 水平的玉米赤 霉烯酮的回收率均 > 90. 0 %。
称取 1～5g 样品 ,精确至 0. 01g ,置于 50mL 的 三角瓶中 ,加入 20mL 正己烷溶液 ,涡旋混合均匀 。 把样品稀释液倒入预处理好的氨基固相萃取柱上 , 待溶液完全流过后 ,依次用正己烷 、正己烷和乙酸乙 酯混合液 (60 + 40) 各 5mL 淋洗 ,再依次用 2mL 乙 酸乙酯 、4mL 甲醇洗脱 ,收集洗脱相 ,50 ℃氮气吹至 近干 。残余物加 1mL 30 %乙腈 ,涡旋混合 1min ,使 用 0. 2μm 有机滤膜过滤 ,供液相色谱 - 串联质谱仪 测定 。
3 曾红燕 ,黎源倩 ,敬海泉. 分析化学. 2006 ,34 (3) : 351 355
4 Tanaka T , Yo nedaa A , Ino uea S. Jo urnal of Chromatog2 rap hy A ,2000 (882) : 23 - 28
5 罗雪云 ,胡霞 ,李玉伟. 卫生研究. 1993 ,22 (2) :l12 - l15 6 Schollenberger M , Martin H. Food Co nt rol ,2008 (19) :
2
花生油
4
调和油
4
其他
5
2Байду номын сангаас
120
187
4
2. 0
51. 7
2
1. 0
3. 0
3
0. 2
5. 0
注 : 其他为棉籽油 ,葵花籽油 ,紫苏籽油 ,橄榄油 。
1 张艺兵 ,鲍蕾 ,褚庆华. 农产品中真菌毒素的检测分析. 北京 :化学工业出版社 ,2006 :13 - 14
2 Co mmission Regulatio n ( EC) No 1881/ 2006 , Official Journal of t he European U nion : L364 - L388
表 1 回收率及精密度试验结果 (n = 6)
样品
添加值 (μg/ kg)
测定值 (μg/ kg)
回收率 ( %)
RSD ( %)
1. 0
0. 90
90. 1 %
3. 50
4 结 论
本文用正己烷对样品直接稀释后 ,采用固相萃 取柱对待测物进行净化 、高效液相色谱法分离 、串联 四极杆质谱法检测 ,成功建立了食用油中玉米赤霉 烯酮的高效液相色谱 - 串联质谱测定方法 。本法简 便 、快速 、准确 ,检测下限为 l. 0μg/ kg 。
SB - C18 色谱柱 (30mm ×4. 6 mm ,3. 5μm) ;流 动相为乙腈/ 0. 2 %乙酸水溶液 (50 + 50) ,流速0. 3 mL/ min ,进样量 10μL 。 21 3 质谱条件
质谱扫描方式为负离子扫描 ;检测方式为多反
作者简介 : 李鹏 ,女 ,1979 年出生 ,工程师 ,长期从事液相色谱分析工作 。E2mail : lipeng713 @hot mail . com
应监测 ;碰撞气为氮气 ;电喷雾电压 3500V ;锥孔电 压 180V ;碰撞能量 22V ;雾化气温度 300 ℃;雾化气 流速 12L/ min 。 21 4 标准溶液的配制
将玉米赤霉烯酮溶于甲醇 ,配制成 1mg/ mL 的 储备液 ,保存于 4 ℃冰箱中 。分别使用甲醇和丙酮 稀释两份标准储备液 ,使其浓度达到 1μg/ mL 。再 从甲醇溶液中分别吸取 0. 01 、0. 05 、0. 1 、0. 2 、0. 4 、 0. 6 、0. 8mL 至 10mL 的容量瓶中 ,使用 30 %乙腈水 溶液进行稀释 ,使标准曲线溶液的浓度点分别为 1 、 5 、10 、20 、40 、60 、80 、100 ×10 - 9 。 21 5 样品制备
图 1 玉米赤霉烯酮的子离子全扫描质谱图
应用高效液相色谱 - 串联质谱法测定时 ,分别 用 30 %乙腈和样品基质溶液配制标准曲线溶液 ,考 察了基质对离子检测的干扰 。通过实验比较证明 , 样品经过净化过程后 ,基质对检测无影响 (见图 2) 。
3 结果与讨论
31 1 净化条件的选择 食用植物油中含有大量的油脂 ,如何从植物油
参考文献
油
10. 0
9. 22
92. 2 %
2. 01
100. 0
95. 0
95. 0 %
1. 89
31 7 样品测试 用本法测定 7 种食用油 ,结果见表 2 。
表 2 食用植物油中玉米赤霉烯酮含量测定结果
样品 种类
测定 数量
检出样品 最小值 最大值 数量 (μg/ kg) (μg/ kg)
玉米油
对按 21 4 所法配制标准曲线溶液 ,在所确定的 实验条件下进行检测 ,测定峰面积 。以样品中玉米 赤霉烯酮含量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准 曲线 ,其线性方程为 : y = 217 x + 56 , 相关系数 ( r) 为 0. 998 。 31 6 方法的回收率与精密度
称取 5. 0g 的空白样品 ,分别加入 1μg/ mL 的乙 酸乙酯标准溶液 5 、50 、500μL ,相当于样品中分别含 有 1 、10 、100μg/ kg的玉米赤霉烯酮 ,按21 5方法制