Arch3.0-EYFP pHBAAV- CAG -DIO-
hCHETA-EYFP pHBAAV-CMV-DIO-
eNpHR3.0-EYFP pHBAAV-CMV-DIOhChR2(H134R)-mcherry pHBAAV-CMV-DIO-
ArchT-EYFP pHBAAV-CMV-DIOC1V1 (t/t)-TS-mcherry pHBAAV-CMV-DIO-
EYFP
否
红光 激活
pHBAAV-hSyn-C1V1(t/t)-TS-mcherry
mcherry
否
pHBAAV-hSyn-Arch3.0抑制
EYFP
EYFP
否
激活
pHBAAV-hSyn-DIOhCHETA-EYFP
EYFP
否
抑制
pHBAAV-GFAPeNpHR3.0-EYFP
EYFP
否
pHBAAV-GFAP激活
否
circRNA 过
pHBAAV-CMV-
1.2 kb
CMV，广谱，强
ZsGreen
否
表达
crRNA-EF1-ZsGreen
pHBAAV-gRNA-
在体敲除
gRNA
U6
saCas9
无
否
2) 汉恒生物 AAV 光遗传学工具现货列表（表 2）
载体 类型 抑制
激活
抑制 红光 激活 抑制
激活
抑制
激活
抑制 红光 激活 抑制
特异启动子，强
标记基因 GFP GFP GFP
是否 Cre 依赖 是
否 否
CAG（CMV 和鸡 beta-
Gq-
pHBAAV-CAG-DIO-
actin 嵌合型启动子），广 mCherry
是
DREADD hM3D(Gq)-mCherry
谱，强
CAG（CMV 和鸡 beta-
Gi-
pHBAAV-CAG-DIO-
腺相关病毒（AAV）操作手册
目录
一、 AAV 安全注意事项 二、 AAV 储存和稀释注意事项 三、 AAV 介绍 四、 汉恒生物 AAV 产品服务及载体信息与现货列表 五、 AAV 整体实验流程 六、 实验材料 七、 AAV 载体构建 八、 AAV 包装 九、 AAV 收集和纯化 十、 AAV 滴度测定 十一、 AAV 感染细胞测试 十二、 AAV 用于动物实验（重磅干货，五星推荐） 十三、 案例分享
4) 汉恒生物 AAV-mRFP-GFP-LC3 自噬流监测工具（表 4）
载体 类型 双标 单标
载体名称
pHBAAV-mRFP-GFP-LC3 pHBAAV-GFP-LC3
启动子及其特点
CMV，广谱，强 CMV，广谱，强
标记基因
mRFP/GFP GFP
是否 Cre 依赖 否 否
五、整体实验流程（图 2）
hSyn（人源成熟神经元特 异启动子），中强度
标记基因 EYFP
mcherry EYFP
mcherry EYFP EYFP EYFP
mcherry EYFP
mcherry EYFP EYFP EYFP
mcherry
是否 Cre 依赖 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 否 否
抑制
pHBAAV-hSyn-ArchTEYFP
pHBAAV-CMV-MCSEF1-ZsGreen
pHBAAV-CAG-MCST2A-ZsGreen
pHBAAV-CAG-MCST2A-mcherry
pHBAAV-CAG-DIOMCS-T2A-ZsGreen pHBAAV-CAG-DIOMCS-T2A-mCherry pHBAAV-hsyn-MCS-
是否 Cre 依赖 否 否 否 否 是 是 否 否 否 否
pHBAAV-GFAP-T2A-
GFAP，星形胶质细
1.6 kb
EGFP
否
EGFP
胞，中强度
干扰
pHBAAV-U6-MCSCMV-ZsGreen
pHBAAV-U6-CMVmCherry
shRNA shRNA
U6
ZsGreen
否
U6
mcherry
否
激活
pHBAAV-GFAPhCHETA-EYFP
EYFP
否
抑制
pHBAAV-CaMKIIeNpHR3.0-EYFP
EYFP
否
pHBAAV-CaMKII激活
hChR2(H134R)-mcherry
mcherry
否
pHBAAV-CaMKII-
抑制
EYFP
否
ArchT-EYFP
CaMKII（兴奋性经元神经
启动子及其特点
CMV，广谱，强
CMV，广谱，强
CAG，广谱，强
CAG，广谱，强
CAG，广谱，强
CAG，广谱，强 hSyn，成熟神经
元，中强度 hSyn，成熟神经
元，中强度 CamkII，兴奋性经元 神经特异启动子，强 CamkII，兴奋性经元 神经特异启动子，强
标记基因 ZsGreen ZsGreen ZsGreen mcherry ZsGreen mcherry ZsGreen mcherry ZsGreen mcherry
激活
抑制
激活
载体名称
pHBAAV-CAG-DIOeNpHR3.0-EYFP
pHBAAV- CAG -DIOhChR2(H134R)-mcherry
pHBAAV- CAG -DIOArchT-EYFP
pHBAAV- CAG -DIOC1V1 (t/t)-TS-mcherry pHBAAV- CAG -DIO-
附录 1 附录 2
一、AAV 安全使用注意事项（*非常重要！！！*）
1) AAV 相关实验请在生物安全柜（BL-2 级别）内操作。 2) 操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。 3) 操作病毒时特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用 70%乙醇
加 1%的 SDS 溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液请用 84 消毒 液浸泡后统一处理。 4) 如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。 5) 动物注射操作请在生物安全柜内（BL-2 级别）完成。 6) 病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。 7) 实验完毕用洗手液清洗双手。 二、AAV 储存和稀释注意事项 1. AAV 的储存 收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于 4℃保存（一周内使用完最佳）；如需长 期保存请分装后放置于-80℃。 注：a．反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融病毒滴度会降低 10%-50%），因此在病毒使用过程中 应尽量避免反复冻融。汉恒生物已对病毒进行了分装（200 l/tube），收到后请直接放置-80℃保存即 可。
图 1、 AAV2 基因组结构示意图。 四、汉恒生物 AAV 产品服务及载体信息与现货列表 1. 汉恒 AAV 产品分类：
常规基因的过表达和干扰定制（载体列表见“七、载体构建”部分）； 组织特异性启动子过表达定制（载体列表见“七、载体构建”部分）； 常规启动子和组织特异性启动子驱动的 AAV-Cas9 定制； AAV 介导的光遗传、化学遗传载体现货及改造服务等（见表 1）； 双标、单标 LC3 自噬流监测工具（见表 2）； 组织特异性 AAV-DIO 载体的定制（原理见附件 2）。 2. 汉恒 AAV 产品特点：
hChR2(H134R)-mcherry
mcherry
否
pHBAAV-GFAP-ArchT-
抑制
EYFP
否
EYFP
GFAP（星形胶质细胞特异
红光 激活
pHBAAV-GFAPC1V1 (t/t)-TS-mcherry
启动子），中强度
mcherry
否
抑制
pHBAAV-GFAPArch3.0-EYFP
EYFP
T2A-ZsGreen pHBAAV-hsyn-MCS-
T2A-mCherry pHBAAV-CamkII-MCS-
T2A-ZsGreen pHBAAV-CamkII-MCS-
T2A-mCherry
可插入片段 大小
1.6 kb 1.2 kb 1.5 kb 1.5 kb 1.2 kb 1.2 kb 1.6 kb 1.6 kb 1.6 kb 1.6 kb
actin 嵌合型启动子），广 mCherry
是
DREADD hM4D(Gi)-mCherry
谱，强
Gq-
pHBAAV-hSyn-DIO- hSyn（人源成熟神经元特
mCherry
是
DREADD hM3D(Gq)-mCherry
异启动子），中强度
Gi-
pHBAAV-hSyn-DIO- hSyn（人源成熟神经元特
红光 激活
pHBAAV-CaMKIIC1V1 (t/t)-TS-mcherry
特异启动子），强
mcherry
否
抑制
pHBAAV-CaMKIIArch3.0-EYFP
EYFP
否
激活
pHBAAV-CaMKIIhCHETA-EYFP
EYFP
否
3) 汉恒生物 AAV 化学遗传学工具现货列表（表 3）
载体类型
安全-AAV 不参与任何疾病的发生，已经用于临床疾病的治疗；
高效-病毒滴度高达 1013 以上，组织感染能力超强；
表达周期久-AAV 免疫原性超低，基因持续表达半年以上；
最全血清型-拥有全部 12 种血清型和一系列突变体亚型，几乎可以感染所有的组织
和脏器；
组织特异性-拥有 DIO 元件载体系统和最全的组织特异性启动子工具箱，如心脏、