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Fenton反应产生的羟基自由基及其清除的分光光度法测定
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2 结果与讨论
1 实验部分
1.1 仪器与试剂 TU(1810PC 紫外可见分光光度计( 北京普析 通用仪器公司) , pH- 2C 型精密酸度计 ( 上海雷 磁仪器厂) 。Fe2+- EDTA( 摩尔比 1:1) : 0.03mol/L; DMSO: 0.01mol/L; H2O2: 0.10mol/L; pH 5.9 的 KH2PO4 - Na2HPO4 缓 冲 液 : 0.067 mol/L; KOH: 10%; 2, 4- 二硝基苯肼: 0.03mol/L, 每天新配制; 所用试剂均为分析纯, 水为二次蒸馏水。
1.2 实验方法 1.2.1 羟 基 自 由 基 的 产 生 在 10mL 的 反 应 溶液中, 含 pH 5.9 KH2PO4- Na2HPO4( 0.067mol/ L) 2mL, DMSO (1.0mmol/L),Fe2+- EDTA( 0.9mmol/ L) , H2O2(2.0mmol/L),混 合 溶 液 于 37℃水 浴 反 应 15min。 1.2.2 羟基自由基的测定 在上述溶液中加 入 0.5mL DNPH 于 60℃水浴反应 20min, 取出后 流 水 冷 却 , 再 加 入 2mLKOH, 溶 液 最 终 pH 为 11.8, 摇匀, 于 390nm 测定吸光值。
( 1.首都师范大学化学系 北京, 100037; 2.广州冷机股份有限公司, 广州, 510470)
摘要: Fent on 反应产生的羟基自由基氧化二甲亚砜( DMSO) 生成的甲醛与 2, 4- 二硝基苯肼 ( DNPH) 反应在碱性条件下生成稳定的酒红色腙类物质, 其最大吸收波长为 390nm, 光度法测 定其含量可间接测定·OH的生成量。拟定的方法测定了数种清除剂的 I C50。该方法简便可靠, 可用于羟基自由基清除剂的筛选. 关键词: 羟基自由基; 清除剂; 2, 4- 二硝基苯肼; 分光光度法 中图分类号: O657·32 文献标识码: A 文章编号: CN11- 5340 /N(2007)01- 0001- 02
2.5 DMSO 用量ick V L. Free radicals[J]. Clinical Chemistry,
1993, 65(12):374- 377 [2] Keizo T, Kaori F, Kazunori A, Toshihiko O. In vivo
1.853, 1.841, 1.854, 1.849, 1.860, RSD 为 0.38% 。
可见, 本法具有良好的准确性与重现性。
2.9 清除剂对 OH·的清除作用
清 除 剂 清 除 羟 基 自 由 基 IC50 的 求 算 : 在 1.2.1 体系中加入一定量的清除剂, 按 1.2.2 的方
法测定吸光度 A, 按下式计算: 清除率=( A0- As) / A0×100%, A0 为未加清除剂时的吸光度, As 为清 除剂存在时的吸光度, 以清除率对清除剂浓度作
( 责任编辑 何艳)
( 上接第 2 页)
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* 收稿日期: 2007- 01- 18 ** 作者简介: 宋艳( 1981- ) , 女, 山东淄博市人, 首都师范大学化学系硕士研究生。
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北京教育学院学报( 自然科学版)
图 1 吸收光谱图 1 DMSO + Fe2+- EDTA + H2O2 + DNPH; 2 DMSO + Fe2+- EDTA +H2O2+DNPH +antioxidant; 3 DNPH
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图, 得到清除剂的 IC50, 如表 1 所示。
表 1: 羟基自由基清除剂的 IC50
Scavenger
IC50(mmol/L) This method Values in reference
Mannitol Thiourea L- Arginine L- Cystein L- Tryptophane L- Histidine
2.4 H2O2 用量影响( 图 3) Fenton 体 系 自 身 可 以 产 生 H2O2, 但 额 外 H2O2 的加入可以提高自由基的产生量。实验结 果表明, H2O2 的浓度达到 1mmol/L 时, 吸光度最 大且趋于平稳, 实验选择 2mmol/L。
当 DMSO 用量大于 0.6mmol/L 时, 吸光度达
第 2 卷第 1 期 2007 年 2 月
北京教育学院学报( 自然科学版) JOURNAL OF BEIJING INSTTTUTE OF EDUCATION( NATURAL SCIENCE)
Vol.2 No.1 Feb.2007
Fenton 反应产生的羟基自由基及其清除的 分光光度法测定 *
宋艳 1** 邹洪 1 董瑞 2
平稳。选择 pH 为 11.8。 2.3 Fe2+- EDTA 用量影响( 图 2) 改 变 Fe2+- EDTA( 1:1) 的 用 量 进 行 测 定 , 当
Fe2+- EDTA 用量大于 0.3mL 时, 吸光度最大且基 本稳定, 本实验选择 0.3mL, 浓度为 0.9mmol/L。
图 2 Fe2+- EDTA 浓度的影响 DMSO:1mmol/L H2O2:2mmol/L DNPH:1.5mmol/L pH:11.8
改变 DNPH 的用量, 结果表明, 当 DNPH 的
用量大于 0.5mL 时, 吸光度达到最大且基本稳
定。实验选择 DNPH 浓度为 1.5mmol/L。
2.8 方法的准确性与精密度
当没有清除剂存在时, 按实验方法, 对于
1.0mmol/L DMSO, 5 次 测 定 的 吸 光 度 ( A) 为 :
A Study On Solution- Focused Br ief Counseling Shen Wen
(Department of Education,Hunan Normal University,Changsha 410081, China) Abstr act:Solution - focused brief counseling is a new mode, gaining its popularity within psychological services across the world and widely used in different circumstances for its many advantages, such as positive thinking, time - and labor - saving. This paper introduces its background, explores its basic thought, points out its applied fields, and gives a simple assessment of it. Key wor ds:Solution- focused brief counseling; brief counseling; psychological counseling
16.67 1.46 3.68 1.04 1.21 1.08
2.90 [6] 0.19 [6] 1.20 [6] 0.16 [6] 0.24 [6] 0.17 [6]
图 3 H2O2 浓度的影响 DMSO:1mmol/L
Fe2+- EDTA:0.9mmol/L DNPH:1.5mmol/L pH:11.8