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2018微生物检验专业技术师考点

(4)病毒感染力的滴定:常用的病毒感染力的滴定有两种方法,一种方法是用实验动物测定LD50(半数致死量),另一种方法是在组织细胞上测定TCID50(半数细胞培养物感染量)。
(5)病毒的保存:分离或鉴定后的病毒经过冷冻干燥后可以长期保存。
2.病毒形态学检查 快速有效的标本制作技术故然重要,但更需要识别病毒结.紫外透射仪 该仪器使用条件是暗室和紫外线,主要用于在紫外线下看DNA条带。
4.色谱气相色谱可做微生物分类和鉴定,用于微生物的化学成分分析。液相色谱仪也可做微生物化学成分分析。质谱仪也可做微生物化学成分分析。
5.测序仪蛋白测序仪测定氨基酸排列顺序,DNA测序仪是测核苷酸排列顺序。能做DNA测序的物质是质粒、噬菌体、PCR产物。
PFGE是脉冲电场凝胶电泳,PAGE是聚丙烯酰胺凝胶电泳。
9.PAGE 用于蛋白和核酸分离,原理是凝胶介质形成立体多孔网状结构,具有分子筛和电泳作用。分离条带上边是大分子,下边是小分子物质。过硫酸铵在PAGE制备起催化聚合作用。SDS-PAGE是十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,它用于蛋白分离,在此电泳中,丙烯酰胺浓度越大,线性分离范围越小;该物浓度越小,线性分离范围越大,十二烷基硫酸钠作用是解离蛋白,用标准蛋白做标识测验电泳条带分子量。在SDS-PAGE中常用蛋白染料是考马斯亮蓝,硝酸银也是其常用染料。该电泳中缓冲液重要成分为甘氨酸。
(5)X线晶体衍射法 但标本必须为结晶,可用于无包膜病毒的研究。
(1)光学显微镜 仅用于大病毒颗粒(如痘类病毒)和病毒包涵体的检查。
(2)电子显微镜检查法
(3)超过滤法 用不同孔径的火棉胶滤膜过滤病毒悬液,将获得的滤液接种于组织细胞、实验动物或鸡胚,或用血凝试验来测定病毒是否通过滤膜,从而估计病毒的大小。
(4)超速离心法 根据病毒大小的不同,其沉降速度也不同。可用超速离心法测得病毒的沉降系数(S),借以计算病毒的大小。
12、琼脂糖凝胶电泳 此电泳用于核酸分离与纯化,用水平电泳槽。分离DNA片段最佳范围为200bp~50kb。
13、聚丙烯酰胺电泳 该电泳通常用垂直电泳槽,分离DNA片段是最佳范围是5~500bp。
14.中华人民共和国国家标准GB 19489--2004《实验室生物安全通用要求》根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级:
10、等电聚焦电泳 其原理是以两性电解质制造凝胶有不同pH,使带不同电荷的多肽在电泳条件下于等电点停留。 两性电解质是制备该电泳凝胶不同pH重要物质,用聚丙烯酰胺制备等电聚焦电泳凝胶。这种电泳主要用于蛋白质分离。
11、脉冲电泳 脉冲电泳用于核酸分离,其优点是分离大片段核酸。用琼脂糖制备该电泳凝胶的介质。这种电泳的电场为正交的交变脉冲电场。脉冲电场凝胶电泳条带靠近负极为大片段DNA,靠近正极为小片段DNA。DNA染色可用溴化乙锭,也可用硝酸银。因溴化乙锭有致癌作用,故在使用时应注意。丙烯酰胺具有神经毒,在用时注意个人防护。
(2)细胞病变(CPE):大部分病毒在敏感细胞系均可出现CPE,CPE可以表现为严重的细胞破坏、细胞肿大、颗粒增多、细胞融合成合胞体或无明显的细胞变化等。CPE经常具有病毒“种”的特性,因此常常作为病毒鉴定的依据之一。
(3)病毒蚀斑(又称空斑)技术:病毒蚀斑是指病毒在已长成的单层细胞上形成的局限性病灶,主要用于病毒的纯化或病毒悬液中感染病毒含量的测定。
6.扩增仪 PCR是聚合酶链反应缩写,能做PCR称DNA扩增仪。它能以一定DNA片段为模板,变换温度,扩增该片段。常用的“枪”是实验室常用的微量可调移液器。
7.酶标做ELISA的仪器称酶标仪,做EUSA反应,其中主要设备有塑料凹孔板、洗板机和酶标仪。
8.电泳类别 醋酸纤维膜电泳可用于免疫球蛋白鉴定,琼脂免疫电泳用于蛋白分离和鉴定,对流免疫电泳可测抗原或抗体,火箭电泳测抗原量,交叉定量免疫电泳测抗原量。IFE是等电聚焦电泳。
病毒篇
1.用于病毒分离的材料,无论是传代病毒培养物,还是采自发病或死亡动物的病料,都应尽快送往实验室作病毒分离或鉴定。组织细胞或动物接种和传代可以应用于病毒的分离和鉴定。病毒对细胞的感染性具严格的选择性和特异性,因此用组织培养细胞接种病毒必须首先选择敏感细胞。
(1)病毒增殖的判定:病毒在实验动物体和组织培养细胞内增殖,显然都会影响机体和细胞的代谢和生命活动,并且经常通过一定的形态学和病理学变化表现出来。
危害等级Ⅰ(低个体危害,低群体危害)不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。
危害等级Ⅱ(中等个体危害,有限群体危害)能引起人或动物发病,但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病,具备有效治疗和预防措施,并且传播风险有限。
危害等级Ⅲ(高个体危害,低群体危害)能引起人或动物严重疾病,或造成严重经济损失,但通常不能因偶然接触而在个体间传播,或能用抗生素抗寄生虫药治疗的病原体。
危害等级Ⅳ(高个体危害,高群体危害)能引起人或动物非常严重的疾病,一般不能治愈,容易直接、间接或因偶然接触在人与人,或动物与人,或人与动物,或动物与动物之间传播的病原体。
15.保存的病原微生物菌(毒)种要按规定进行登记、上报和核准,实行双人双锁管理和使用审批制度。 保存和使用各类病原微生物菌(毒)种的实验室,应具备相应的实验室设备和设施条件,并在二级以上生物安全柜中操作。细菌实验室在污染情况超过许可程度时,通常采取甲醛熏蒸消毒。
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1.仪器的标识管理:红(停用)黄(准用)绿(合格)各自所表明的状态。
2.分光光度计检测细菌浓度用可见光分光光度计,测细菌波长用600nm。检测蛋白用紫外分光光度计(波长用280nm),它也可测核酸浓度(波长260nm)。选定分光光度计测定颜色反应光的波长是450nm。石英比色皿用于紫外分光光度计,玻璃比色皿用于可见光分光光度计。
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