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二、无病毒苗培育的意义 采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微 ，甚至毫无成效。自从50年代发现通过组织培养的方 法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提高产量、 质量后（如草莓可增产20～50％，植株结果多，单果 重增加，上等果比例提高。菊花切花品种的脱毒株， 表现出株高增加，切花数增多，花朵大，切花较重） 。因此到60至70年代组织培养的技术在花卉、蔬菜和 果树等得到广泛的应用。
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二、培养基 一般以White、• Morel和MS培养基作为基本 培养基，尤其是提高钾盐和铵盐含量有利于茎尖 的生长。• MS培养基对某些植物的茎尖培养时， 其中有些离子浓度过高应予以稀释。•
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茎尖培养中，• 由于操作方便，一般都使 用琼脂培养基。不过，在琼脂培养基能诱导 外植体愈伤组织化的情况下，最好还是用液 体培养基。在进行液体培养时，须制作一个 滤纸桥，把桥的两臂浸入试管内的培养基中 ，桥面悬于培养基上，外植体放在桥面上。
三、茎尖培养方法 进行脱毒培养时，• 由于微小的茎尖组织很难靠肉 眼操作，因而需要一台带有适当光源的简单的解剖镜 (8～40X)。除了在进行植物组织无菌培养一般工具外 ，• 还需要一套解剖刀。剥离茎尖时，应尽快接种，茎 尖暴露的时间应当越短越好，• 以防茎尖变干。可在一 个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，有助于防止 茎尖变干。
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一般来说，茎尖分生组织由和其它器官的培养 一样，• 在进行茎尖培养时，首要一步是获得表面不 带病原菌的外植体。• 一般来说，茎尖分生组织由于 有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖， 无须表面消毒就应当能得到无菌的外植体。• 有时消 毒处理仅会增加培养物的污染率。选取茎尖前，可 把供试植株种在无菌的盆土中，• 放在温室中进行栽 培。浇水时要直接浇在土壤中而不要浇在叶片上。• 另外，最好还要给植株定期喷施内吸杀菌剂，可用 多菌灵(0.1%)和 • 抗生素（如0.1%链霉素）。对于某 些田间种植的材料，可以切取插条插入Knop溶液 中令其长大，• 由这些插条的腋芽长成的枝条，要比 由田间植株上直接取来的枝条污染小得多。
为了保险起见，在切取外植体之前一般仍须对茎芽进行表 面消毒。叶片包被严紧的芽，如菊花，兰花，只须在75%酒精 中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹，蒜和马铃薯等 ，则要用0.1%次氯酸钠表面消毒10分钟。对于这些消毒方法 ，在工作中应灵活运用，如在大蒜茎尖培养时，可将小鳞茎在 75%酒精中浸蘸一下，再用灯火烧掉酒精，然后解剖出无菌茎 芽。
以种子进行繁殖的种类，除豆类外，• 可随着世代的交替而去 除病毒，即病毒只能危害一个世代；而行无性繁殖的种类，• 由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，• 危害日 趋严重。一些园艺植物以小规模集约栽培，造成连作危害问 题，并加重土壤传染性病毒的危害。
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为了提高作物的产量和质量，根除病毒和其它病 原菌是非常必要的。 但现在还没有什么药物可治愈受病毒侵染的植物。 若一个无性系的整个群体都已受到侵染，• 获得无病毒 植株的唯一方法就是消除营养体的病原菌，• 并由这些 组织中再生出完整的植株。一旦获得了一个不带病原 菌的植株，• 就可在不致受到重新侵染的条件下，对它 进行营养繁殖。用组织培养法消除病毒是唯一行之有 效的方法。
四、影响微茎尖培养的因素 １．外植体大小 在最适培养条件下，外植体的大小决定茎尖的存活率，外 植体越大，产生再生植株的机会也就越多，而外植体越小脱毒 效果越好。除了外植体的大小之外，叶原基的存在与否也影响 分生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生组织提 供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。在含有必要的生 长调节物质的培养基中，离体顶端分生组织能在组织重建过程 中迅速形成双极性两端。
病毒的危害给作物生产带来重大的损失。• 如草莓病毒的危 害，使草莓产量严重降低， • 品 质大大退化。葡萄扇叶病毒使 葡萄减产 10～18% ，为害马铃薯有几十种病毒， • 给马铃薯生 产带来严重障碍。花卉上病毒的危害大大影响其观赏价值， 表现花少而小，产生畸形、变色等。
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无Байду номын сангаас毒苗的培育
掌握植物微茎尖培养的脱毒方法 一般掌握无毒苗木的鉴定方法 掌握组织培养脱毒苗在生产上的重要意义 一般掌握脱毒苗木的保存和利用方法
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一、病毒在植物上的危害
危害植物的病毒有几百种，• 且随着生产栽培时间的延长， 危害越来越甚，• 种类越来越多。
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于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细 解剖，无须表面消毒就应当能得到无菌的外植体。• 有时消毒处理仅会增加培养物的污染率。选取茎尖 前，可把供试植株种在无菌的盆土中，• 放在温室中 进行栽培。浇水时要直接浇在土壤中而不要浇在叶 片上。• 另外，最好还要给植株定期喷施内吸杀菌剂 ，可用多菌灵(0.1%)• 和抗生素（如0.1%链霉素）。 对于某些田间种植的材料，可以切取插条插入 Knop溶液中令其长大，• 由这些插条的腋芽长成的 枝条，要比由田间植株上直接取来的枝条污染小得 多。
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在剖取茎尖时，把茎芽置于解剖镜下，一手用细镊子将 其按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针要常 常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。但要注意解剖 针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。当一个闪亮半圆球的顶 端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下 来，为了提高成活率，可带1～2枚幼叶，然后将其接到培养 基上。• 接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接 种即可。 将接处好的茎尖置于22℃左右的温度。每天16小时2000～ 3000Lx的光照条件下培养。由于在低温和短日照下，茎尖 有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保 证。微茎尖需数月培养才能成功。
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茎尖培养脱毒
一、茎尖培养脱毒 感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，• 病毒的 数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病 毒的感染深度越低，生长点（约0.1～1.0mm区域） 则几乎不含或含病毒很少。这是因为分生区域内无维 管束，病毒只能通过胞间连丝传递，• 赶不上细胞不断 分裂和活跃的生长速度。在切取茎尖时越小越好，• 但 太小则不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。 茎尖培养脱毒，• 由于其脱毒效果好，后代稳定，所 以是目前培育无病毒苗的最广泛最重要的一个途径。
植物激素的种类与浓度对茎尖生长和发育具有 重要的作用。在双子叶植物植物激素大概是在第2 对最年幼的叶原基中合成，• 所以茎尖的圆锥组织生 长激素不能自给，必须提高适当浓度的生长素(0.1 ～0.5mg/L)与细胞分裂素，在生长素中应避免使用 易促进愈伤组织化的2,4－D，宜换用稳定性较好的 NAA或IBA，细胞分裂素可用KT或BA。GA3对某 些植物茎尖培养是有用的。有时茎尖培养添加活性 炭。
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２．培养条件 在茎尖培养中，照光培养的效果通常比暗培养好，如马铃 薯茎尖培养时，当茎已长到1厘米高时光照强度增加到4000Lx 。 ３．外植体的生理状态 茎尖最好要由活跃生长的芽上切取，在香石竹和菊花中， 培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。但在草莓中，二者没什 么差别。 取芽的时间也很重要，一般选作萌动期较好。否则采用某 种适当的处理、打破休眠才能进行。