专题04 动物细胞工程【基础回顾】1.动物细胞培养——动物细胞工程技术的基础(1)动物细胞的培养过程(2)培养条件①无菌、无毒的环境：对和所有培养用具进行无菌处理，添加，定期更换培养液以清除。

②营养：除正常的有机和无机营养外，加入等一些天然成分。

③适宜的温度和pH：温度为℃(哺乳动物)，pH为。

④气体环境：含95%空气加的混合气体，其中后者的作用是。

(3)应用：生物制品的生产、检测有毒物质、医学研究。

2.动物体细胞核移植技术和克隆动物(1)动物体细胞核移植技术的过程(2)原理：。

(3)结果：。

(4)应用：①加速家畜进程，促进优良畜群繁育。

②保护。

③生产医用蛋白。

④作为异种移植的供体。

⑤用于组织器官的移植。

3.动物细胞融合和单克隆抗体的制备(1)动物细胞融合①原理：。

②融合方法：聚乙二醇(PEG)、、电激等。

③意义：突破了的局限，使成为可能，也为制造开辟了新途径。

(2)单克隆抗体①制备过程②优点：特异性强、，可大量制备。

③用途：作为；用于治疗疾病和。

【想一想】例1.如图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。

下列判断错误的是A．B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养B．接触抑制现象主要发生在AB段和DE段C．分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆D．E点后的细胞大多数具有异倍体核型，从而可连续传代例2.核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径(如图)。

正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。

现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。

关于筛选原理的叙述，正确的是A．免疫的B细胞及其互相融合细胞因全合成途径被A阻断而在HAT培养基上不能增殖B．骨髓瘤细胞及其互相融合细胞因无法进行上述两个途径而在HAT培养基上不能增殖C．杂交瘤细胞因为可以进行上述两个途径所以能在HAT培养基上大量增殖D．HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞既能大量增殖又能产生高纯度的目标抗体例3.下图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，有关叙述不正确的是A．图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原B．利用聚乙二醇、灭活的病毒和电激等方法均可诱导细胞融合获得乙C．用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能增殖，未融合细胞均不能增殖D．丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁【练一练】1.抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两个合成途径的研究。

下列是利用生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。

下列说法错误的是A．过程①至②所获取的抗体称为单克隆抗体B．③至⑥过程获取抗体的技术称为转基因技术C．过程⑤需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶D．Vl基因体外扩增的技术称为PCR技术2.下列有关单克隆抗体制备的叙述，正确的是A．先利用特定的抗原蛋白饲喂小鼠，再从小鼠脾脏中分离出B淋巴细胞B．体外培养杂交瘤细胞需要在培养液中添加动物血清和一些抗生素C．为避免病毒感染，需用聚乙二醇诱导骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合D．单克隆抗体制备技术和植物体细胞杂交技术均依据细胞的全能性原理3.单克隆抗体在医疗、诊断等方面发挥着越来越重要的作用。

英国科学家米尔斯坦和科勒设计了一个用被免疫的B淋巴细胞制备单克隆抗体的实验，下图为其实验流程图。

则相关的叙述或说法中，不正确的是A．a是骨髓瘤细胞，②表示在选择性培乔基上进行培养B．制备单克隆抗体时，选择B淋巴细胞的原因是它只能分泌多种特异性抗体C．③过程如在体外培养，则需要无菌、无毒，营养充足，温度、pH适宜等环境条件D．诱导动、植物细胞融合常用的一种化学诱导剂是聚乙二醇4.如图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，有关叙述错误的是A．图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原B．利用聚乙二醇、灭活的病毒和电激等方法可诱导细胞融合获得乙C．用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不能生长D．丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁5.某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。

下列叙述正确的是A．制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理肝组织块B．恒温培养箱中的CO2浓度维持在5％左右，以促进细胞呼吸C．为了保证细胞培养所需的无毒环境，需大量添加各种抗生素D．本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小6.据图分析，下列叙述错误的是A．与纤维母细胞相比，过程①形成的诱导干细胞的全能性表现能力较高B．过程②是诱导干细胞基因选择性表达的结果C．过程③中细胞的融合具有随机性D．过程④制备的单克隆抗体能高效治疗多种疾病7.下列关于对某种动物的肝肿瘤细胞进行培养的叙述中，不正确的是A．制备肝肿瘤细胞悬液时，可用胰蛋白酶处理肿瘤组织块B．培养基中通常需加入适量的抗生素、血清或血浆等成分C．体外培养时肿瘤细胞可能失去接触抑制现象而互相堆积D．细胞培养应在含5％CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸8.下列技术或方法与原理不相符的是A．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞增殖B．植物组织培养和制备单克隆抗体——细胞的全能性C．原生质体融合和动物细胞融合——细胞膜的流动性D．纤维素酶、果胶酶处理植物细胞壁——酶的专一性9.某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。

供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。

请回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。

一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量。

(2)在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是。

细胞培养应在含5％的CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是。

(3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长。

药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更。

若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用处理。

(4)为了防止基因培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的。

(5)已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲组细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检验X基因在A、B 两组细胞中的或合成水平的差异，确定Y的药效。

10.人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答：(1)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有。

(2)若要分析杂交瘤细胞中染色体，可通过等过程制成装片，然后在显微镜下观察。

杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是，在HAT培养基上存活的细胞可能包括(填下列序号)。

①无抗体分泌的细胞②抗HPV抗体的分泌细胞③其他无关抗体的分泌细胞(3)对于抗体检测呈性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个／mL，每孔加入细胞稀释液mL[0.1／(1/10)]，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。

(4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是。

(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。

除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再衙要写出一种制备单克隆抗体的思路。

11.下图所示为动物细胞培养的基本过程示意图。

请回答：(1)容器A中放置的一般是幼龄动物的器官或组织，原因是其细胞，易于培养。

培养时先要剪碎，然后用分散细胞，制成B瓶中的细胞悬液。

将细胞悬液转入C瓶中进行的初次培养称为。

(2)细胞正常培养了一段时间后，发现细胞绝大部分死亡，只有极少数细胞存活，这是因为存活的细胞发生了，可无限增殖。

目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为代以内，以保持细胞正常的核型。

(3)C、D瓶中的培养液为保证无菌、无毒的环境，需要添加一定量的。

培养过程中还需要提供O2和CO2等气体环境，CO2的作用主要是。

(4)动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。

下图是血清对正常细胞和癌细培养影响的实验结果。

据图可知，培养细胞一定需要添加血清。

【乐一乐】良鸟择木而栖俗话说“良鸟择木而栖”，最近的两项科学研究表明，鸟类似乎真有挑选住处的本事。

法国和瑞典的学者对瑞典哥特兰岛上的一种京燕进行了跟踪研究，结果发现新婚的京燕夫妇在选择筑巢孵蛋的地点时，往往会参照其它鸟类的经验。

如果某片树林中其它鸟类的雏鸟数量多且健壮，京燕夫妻也会在这里安家。

科学家由此得出结论，“生殖成功”是鸟类选择栖息地的重要标准。

为了验证这一猜想，科学家分别进行了两次试验。

他们将出生只有七天的小鸟搬到别的鸟巢中，人为地造成某片树林适合鸟类生儿育女的假象，结果真有越来越多的京燕来这里筑巢产蛋。

负责这项研究的瑞典科学家认为，这一现象说明鸟类懂得收集“公共信息”，它们的认知能力要比我们以前认为的复杂得多。

古今名言敏而好学，不耻下问——孔子业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随——韩愈兴于《诗》，立于礼，成于乐——孔子己所不欲，勿施于人——孔子读书破万卷，下笔如有神——杜甫读书有三到，谓心到，眼到，口到——朱熹立身以立学为先，立学以读书为本——欧阳修读万卷书，行万里路——刘彝黑发不知勤学早，白首方悔读书迟——颜真卿书卷多情似故人，晨昏忧乐每相亲——于谦书犹药也，善读之可以医愚——刘向莫等闲，白了少年头，空悲切——岳飞发奋识遍天下字，立志读尽人间书——苏轼鸟欲高飞先振翅，人求上进先读书——李苦禅立志宜思真品格，读书须尽苦功夫——阮元非淡泊无以明志，非宁静无以致远——诸葛亮熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟——孙洙《唐诗三百首序》书到用时方恨少，事非经过不知难——陆游问渠那得清如许，为有源头活水来——朱熹旧书不厌百回读，熟读精思子自知——苏轼书痴者文必工，艺痴者技必良——蒲松龄声明访问者可将本资料提供的内容用于个人学习、研究或欣赏，以及其他非商业性或非盈利性用途，但同时应遵守著作权法及其他相关法律的规定，不得侵犯本文档及相关权利人的合法权利。

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