相位差显微镜
四、荧光显微镜
荧光显微镜在光学显微镜中占重要地位。它分辨率高，能直接显示细胞 内的生物化学成分，彩色效果好；易进行定性定量分析，特别是标记 荧光抗体的特异性示踪技术。 1.利用紫外光照射，使标本内荧光物质转化为各种不同颜色荧光后，来观 察标本内某物质性质和位置。 2.装置特点

含紫外光高的照明装置：常用高压汞灯或弧光灯产生光源；
普通光学显微镜结构
（二）显微镜的性能 1.显微镜的分辨率
也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，分辨距离越大，则分 辨率越低。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。 其计算公式为: D=0.61入/N· A N· A· =n · sina/2
式中D为分辨率，A为光波波长，N· A· 为物镜的数值孔径(镜口率)。
② 10X 物 镜 ④聚 光镜升 降旋钮 粗 调 松 紧 调 节 旋 钮
① 标 本
③ 孔径 ⑤ 光轴 光栏 中心调节 ③ 螺钉
视 场 光 聚 光 镜 中 心 调 节 栏
孔径光栏调节
(四)普通显微镜的保养及常见故障
1.显微镜的擦拭 是保养中的重要一环。显微镜要经常保持清洁,避免脏物及试剂沾污显微 镜的光学系统和机械装置。 2.显微镜的保管 普通生物显微镜的保管工作主要是防潮、防尘、防腐蚀、防热四个方面 ; 3.显微镜使用过程中常见故障及维修 镜筒下滑 转换器失灵 镜筒自动倾斜 反光镜脱落 透镜上出现斑点
三、光照培养箱
通常用于植物发芽、 育苗、组织培养、 微生物培养、昆虫、 小动物饲养等,是生 物遗传工程、医学、 农林业、畜牧、水 产、环保等生产和 科研较理想的试验 设备 。
智 能 光 照 培 养 箱
四、离心机
(一)原理与构造
1.是利用离心力对混合溶液进行快 速分离及沉淀的一种实验室常 备仪器。 2.离心机种类很多,有台式、高速、 超高速离心机等 ； (二)使用方法及注意事项 1.将离心机置于平稳台面上,调平、 放稳,有吸盘或吸脚者都要吸牢 台面; 2.将对称位置的离心管调平衡; 3.检查调速装置是否处于零位,容 器室盖是否盖紧,地线是否接地; 4.接通电源,打开开关。设定转速 和时间 5.运转中严禁移动位置和开盖; 6.离心完毕,将调速装置回到零位, 关闭电源开关。待其停稳后方 可开盖,取出离心管。
生物学实用技术
教学内容
第一章 第二章 第三章 第四章 第五章 第六章 第七章 常用生物学仪器使用 生物玻片标本制作技术 植物标本制作技术 动物标本制作技术 生物学教学基本技术 现代教育技术 食药用真菌的栽培技术 第九章 第十章 第十一章 第十二章 第十三章 经济动物饲养技术 组织培养技术 基因工程技术 微生物发酵技术 酶工程技术
微分干涉差显微镜
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微 镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
倒置显微镜
倒置显微镜
六、电子显微镜
（一）透射电子显微镜 （TEM） 1.原理及构造 包括三大部分：
电子枪 电磁透
电子光学部分
样品室 物镜 中间镜 投影镜 观察记录系统
JEOL扫描电子显微镜
人类血细胞SEM照片
（三 ）超薄切片的制作技术

Leabharlann 取材 1mm 小，快，避免挤压 固定 Ph为7.4 2—3%戊二醛 冰箱中保存 →1% 锇酸后固定（PH7.4） 1-2h 脱水 梯度酒精 丙酮 浸泡 环氧树脂 618 、812包埋 修组织块 光学定位及切片，削成锥形小塔状， 顶面积1mm见方，切厚1μ半薄切 片→定位 超薄切片→铜网上 染色 用重金属盐（柠檬酸铅，醋酸铀等）
第二节 其他常用仪器的使用与保养
一、电热干燥箱
(一)电热干燥箱的原理与构造 由两部分组成:一部分是加热、保温装 置,是电热干燥箱的主体;另一部分 是温度控制系统。 1.主体 电热干燥箱的主体框架是由各种型号 的钢及薄钢板构成。箱内有样品室 和加热室。 2.温度控制器
电热恒温干燥箱
由感温探头(热敏电阻)、控温电桥、放 大电路、控温继电器等几部分组成。
一种介 壳虫的 染色体
三、相差显微镜
1940年，荷兰学者Zernik巧妙应用光衍射 和干涉原理创造相差显微镜。
1.利用镜中的特殊装置，即环状光栏和位 相板，将光线通过透明标本后产生的光程 差转化为振幅差的特种显微镜。 2.特殊部件：
环状光栏(聚光器下)
位相板(物镜中) 另外,还有对焦望远镜; 3.暗视野显微镜只能看清细胞外形,看不到 内部结构,而相差显微镜则不仅能看到外形, 而且还能看到内部结构及其细胞分裂等动 态变化过程; 适用于观察普通光学显微镜 看不到的或看不清的活细胞及细胞内结构。
3.放大倍数 显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: V = V1xV2
4.焦深
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物 点 , 而且它的上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。 看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。 物镜的焦深与镜口率成反比，与放大率成反比。
3.观察后的处理工作
清洁 : 显微镜上污物 ( 如残物或灰尘 ), 用绸布或擦镜纸擦干净 , 若擦不干 净可蘸少许二甲苯进行擦拭。擦完后,把物镜转离光轴,把反光镜转到与
载物台垂直的方向 , 以减少灰尘粘落上面 , 而后罩上镜套 , 小心地放回镜
箱内,保存备用。
4.注意事项:
瞳 距 调 节
屈 光 度 调 节
（三）使用方法与注意事项 1.观察前的准备工作
观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双眼同时睁开，一边观 察一边进行记录或描绘。观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准 备好。显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常，并 对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作。然后
光圈失调
二、暗视野显微镜
1.以光丁达尔效应为基础，主要采用特制的集光器，即暗视野显微镜的 聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射 和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。 利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜 高50倍。 2.适用观察原虫、细菌鞭毛、伪足运动等，特别适用胶体微粒，在医学 检查适用观察体液中螺旋体、结晶或各种粒子、尿形管等。
2.镜口率
在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，也称数值孔径，它反应该镜头分辨力大 小，其数字越大，表示分辨率越高。 N· A· =n · sina/2 各物镜的镜口率如下表： 物镜 10× 40× 100× 镜口率(N.A.) 0.25 0.65 1.30 工作距离(mm) 5.40 0.39 0.11
JEM-1011 透射电子显 微镜
内质网透射电镜图（伪彩色）
莱卡超薄切片机
扫描式电子显微镜SEM
透射式电子显微镜TEM
（二）扫描电子显微镜 (SEM) 1.原理及结构 电子光学部分 电子枪、聚光镜、扫描系统、物镜等；
电子信号收集、处理显示系统
真空系统和电源系统
2. 工作原理
从电子枪阴极发射出电子束 , 在阴、阳极间加速电压的作用下 , 射向镜筒。再 经过第一二级聚光镜和物镜会聚作用 , 缩小成几十埃的电子探针 , 在物镜上部 的扫描线圈作用下,在样品表面上作光栅状扫描,并且激发出多种电子信号,这 些信号被相应的检测器捕获经过放大、转换变成电压信号,最后送入显像管的 栅极上并且控制显像管的亮度。显像管中的电子束在荧光屏上也作光栅状扫 描,并且这种扫描运动与样品表面上的电子束的扫描严格同步。这样即获得衬 度与所接收信号强度相对应的扫描电子图像 ,这种 图像就反映了样品表面形 貌或成分的特征;
高 速 冷
冻
离 心 机
五、分光光度计
不同物质具有特征吸收光谱。分光光度法 不仅适应于可见光区，同时还可扩展 至紫外光区及红外光区 。 （一）使用规则 (1)接通电源，仪器自动进入初始化。初 始化约需时10min，当显示器指示 ××nm时，表明仪器完成初始化程序， 可进入检测状态。 (2)输入参数，选择相应比色杯依次放入 比色皿架内，关上比色池盖，自动调 零。 (3)试样槽依次移至样品位置，待数据显 示稳定后按“START/STOP”键，打印 机自动打印所测数据，重复上述步骤， 直到所有样品检测完毕。 (4)检测结束后及时取出比色杯，并洗净 放回原处，同时关上电源，做好使用 情况登记。 （二）注意事项 通电预热 ；比色皿保持清洁；
一、普通光学显微镜
（一）基本结构
物镜:
是决定显微镜的质量、分辨力和放大倍数的最关键部件;
在物镜筒壁上常注有主要性能指标——放大倍数、镜口率等;
①光学
系统: 目镜: 是由上面的接目透镜和下面的会聚透镜二部分组成的,两
者之间装有一个光阑;
照明装置: 聚光器、反光镜、照明光源、滤光器等 ;
②机械装置：用于固定材料和观察方便,包括: 镜座 镜臂 载物台
721型
UV-2401 PC 紫外分 光光度计
六、电泳仪
（一）概述 1.电泳：带电质点在电场中移动的现象。 2.影响电泳速度的因素 电场强度、溶液的pH值、溶液离子强度、电渗等。 3.分类 按支持介质不同可分为：纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 等 按支持介质形状不同可分为：薄层电泳、水平电 泳、柱电泳、垂直电泳等； 按使用目的命名：核酸电泳、血清蛋白电泳、制 备电泳、DNA定序电泳等； （二）电泳仪的使用方法 将电泳槽两个电极与电泳仪的直流输出端联接， 注意极性不要接反； 接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需 电压为止，设定终止时间，此时电泳即开始进行。 完毕后，应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态， 并拨出电泳插头；
进行合轴调节。
2.观察
低倍镜的观察: 高倍镜的观察:
在低倍镜下,找到要进一步观察的部位,并移至视野中心,