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2.1－概念1:精密度 ICH-Q2定义: • 分析方法的精密度指在规定条件下,对均质样品,多次 取样进行一系列检测结果的接近程度(离散程度)
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2.2－容易混淆的精密度中术语 • 仪器重复性 • • 相同人员,仪器,日期,标准液
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2.3.2－推荐重复性测定方法 • 在方法规定的线性范围内重复测定 • • • • 如3个浓度,每个浓度3次 或100%的测试浓度,测定六次
记录每次测定各组分响应 计算各响应值与平均值之间相对标准偏差
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2.3.2.1－概念3:系统重复性 • 相同条件下,同一分析人员对同一样品溶液多次测试 结果的接近程度
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RSD(%) 1.3 2.7 2.8 3.7 5.3 7.3 11 15 21 30
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2.7－重现性 • • 概念 什么时候需要作重现性?
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2.7.1－概念6:重现性 ICH-Q2定义: • 重现性指不同试验室之间的精密度
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7.0－线性度 • • • • 概念 线性范围 推荐线性度测定方法 推荐线性度测定接受标准
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7.1－概念11:线性度 ICH-Q2定义 • 分析方法的线性是指在给定的范围内检测结果与样品 中被分析物的浓度(含量)成比例关系的能力
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2.5－推荐重复性接受标准
• 系统重复性 • S/N>1000,RSD<1% • • • • • 1000>S/N>100,RSD<2% 100>S/N>10,RSD<4% S/N<10,RSD<8% 测定结果的相对标准偏差 • 仪器分析小于2% • 容量分析小于0.3%
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7.2－概念12:线性范围 ICH-Q2定义 • 分析方法的范围是指在样品中被分析物的较高浓度 (量)和较低浓度(量)之间的区间,并已证实区间内,该方 法具有合适的准确性,精密度,线性
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7.3－推荐线性度测定方法 • • • 在含量测定浓度的70%-130%或50%-150%均匀选择 至少六个不同的浓度点 每一个尝试至少需测定四次 记录各对应浓度下的相应响应值
Validation of Analytical Procedure 分析方法验证
第二部分:实验设计与操作
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1.0－讲座目的 • • • 掌握验证试验设计 掌握验证试验操作 了解确定接受标准原则
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2.0－精密度 • • • • • • • 概念 容易混淆的精密度中术语 重复性 中间精密度 推荐重复性接受标准 AOAC浓度与精密度关系 重现性
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方法重复性
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2.6－AOAC浓度与精密度关系
浓度(%) 100 10 1 0.1 0.01 0.001 0.0001 0.00001 0.000001 0.0000001 比率 1 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 单位 100 % 10 % 1% 0.1% 100 ppm 10 ppm 1 ppm 100 ppb 10 ppb 1 ppb
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4.3－信噪比法 • 用于能显示基线噪音的分析方法 • • • 把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出 的信号进行比较 算出能被可靠地检测出的最低浓度或量
一般以信噪比为3:1 或2:1 时相应的浓度或注入仪器 的量确定检测限
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方法重复性 • 相同人员,仪器,日期,重新配制标准液
•
中间精密度 • 不同日期,不同分析人员,不同仪器
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2.3－重复性 • • 概念 推荐重复性测定方法
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2.3.1－概念2:重复性 ICH-Q2定义: • 重复性是指在同样的操作条件下,较短时间间隔的精 密度
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3.3－制剂准确度测定 • • • 用该方法去测按处方量制成的混合物(加入已知量被 测物) 在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方法比较 在精密度,线性和专属性建立后得出
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3.4－杂质准确度测定 • • 在样品(原料/制剂)中加入已知量的杂质 无法得到杂质/降解物的,与采用其他方法测得的结果 比较,可以使用原料的响应值
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3.1－概念7:准确度 ICH-Q2定义 • 分析方法的准确性指的是真实值或认可的参考值与测 量值之间相近程度
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3.2－原料药准确度测定 • • • 用该方法分析已知纯度的分析物 该方法的分析结果与成熟的分析方法相比较,该成熟方 法准确度是已知的 在精密度,线性,专属性建立后,进行推论
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4.4－标准偏差和斜率法 • 根据响应值的标准偏差和斜率 • • • 检测限度(DL)= 3.3σ/s σ:响应值的标准偏差(通过空白样品测背景响 应值或Y轴截距) s: 校正曲线的斜率(通过被测物的校正曲线求 得)
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4.5－推荐检测限测定方法 • • • • • • • 在最灵敏的仪器状态下 测定至少四个空白样品 洗脱时间需覆盖整个样品中所有组分的流出 计算平均噪声水平 然后按信噪比大于2而小于6配制所有组分的样品溶液 每个样品进样三次 计算该组分的最小检测限
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5.0－定量限 • • 概念 推荐定量限测定方法
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5.1－概念9:定量限 ICH-Q2定义: • 某种分析方法的定量限度是指具有合适准确性和精密 度的条件下,能够定量测定分析组分的最低限量。它 是样品中含量低的化合物定量分析的参数,特别适用 于杂质和(或)降解产物的测定
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2.7.2－什么时候需要作重现性? • • 是比较实验室间的差异 当一个方法要升级到法规方法时,需要做这个工作
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3.0－准确度 • • • • • • • 概念 原料药准确度测定 制剂产品准确度测定 杂质准确度测定 推荐准确度测定方法 推荐准确度测定接受标准 AOAC浓度与回收率关系
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5.2－推荐定量限测定方法 • • • • 按检测限方法测定仪器的平均噪声 然后按信噪比等于10.0±0.5配制样品溶液 连续进样三次 计算组分的最小定量限
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6.0－耐用性 • • • 概念 变动因素 色谱分析中耐用性项目
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3.7－AOAC浓度与回收率关系
浓度(%) 100 10 1 0.1 0.01 0.001 0.0001 0.00001 0.000001 0.0000001 比率 1 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 单位 100 % 10 % 1% 0.1% 100 ppm 10 ppm 1 ppm 100 ppb 10 ppb 1 ppb
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6.1－概念10:耐用性 ICH-Q2定义 • 分析方法的耐用性是指试验参数适当地发生细小改变 时,测量能力保持不受影响,可用于说明正常使用时的 可靠性
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6.2－变动因素 • 典型液相色谱法变动因素 • • • • • 流动相的组成 pH值 不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱 柱温 流速等
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8.1－概念13:专属性 ICH-Q2定义 • 专属性是指在一些可能存在的组分,如杂质,降解物,基 质等存在时,对被分析物准确可靠测定的能力
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平均回收率(%) 98-102 98-102 97-103 95-105 90-107 80-110 80-110 80-110 60-115 40-120
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4.0－检测限 • • • • • 概念 直观法 信噪比法 标准偏差和斜率法 推荐检测限测定方法
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2.3.2.4－方法重复性实验 • • • • 取同一批号均匀样品 按照分析方法规定至少称量出六份 按含量测定方法测定每一份样品含量 计算每一次测定的含量与平均含量之间的相对标准偏 差