细胞杀伤事件， 不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机 全要求也在不断提高。随着产品种类的增多，各种功
理。 细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改 能的增加， 通过适当的体外试验方法来加强其生物
变来进行的检测。 四唑盐（ MTT） 比色法是细胞毒性 安全性的控制与保障显得格外重要。
检测常用方法之一，利用线粒体内部酶的活性，可以 １ 材料与方法
细胞株：NCTC 克隆 929（ L929） ，由中国科学院 上海生命科学研究院细胞资源中心引进。
（ 3） 供试样品 医用无菌敷料： 南昌华康医疗科技有限公司
（ Ⅱ型，批号：2012042901；Ⅲ型，批号：2012042901） 1.2 方法 （ 1） 浸提介质 含血清 DMEM 细胞培养基。 （ 2） 对照样品 阴性对照：高密度聚乙烯浸提液。 阳性对照：5%的二甲基亚砜（ DMSO） 溶液。 空白对照：含血清 DMEM 细胞培养基。 （ 3） 样品供试液的制备方法 面积法：浸提比例 1.25cm2∶1ml。 质量法：浸提比例 0.1g∶1ml；根据不同型辅料
将特定的四唑盐类进行转化， 然后通过酶标仪进行
1.1 材料
检测。 体外细胞毒性试验方法经常用于对医疗器械
（ 1） 仪器设备
进行生物学评价， 其结果常常用于判断该器械产品
311CO2 恒 温 培 养 箱 ，Thermo 公 司 ；XDS-1B 倒
的基本生物安全性。
置显微镜，COIC 公司；BS2000S 电子天平，Sartorins
医用敷料，是包伤的基本常用器械产品，是用以 （ 北京） 有限公司；MULTISKAN GO 酶标仪，Thermo
覆盖疮、伤口或其他损害的医用材料。随着对创面愈 公司；全自动立式压力蒸汽灭菌锅，上海博迅实业有
合过程的病理生理的深入研究， 人们对创面愈合过 限公司。
程的理解也越来越深刻， 从而导致了医用创面敷料
关键词：医用无菌敷料；四唑盐（ MTT） 比色法；细胞毒性
中图分类号：R-331
文献标识码：A
文章编号：1671-4792（ 2012） 12-0241-03
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Objective：Compared medical sterile dressing different leaching method was obtained by liquid on
（ 2） 试剂试药
２４１
科技广场 ２０１２．１２
小牛血清，由杭州四季清生物工程材料有限公 司提供；DMEM 培养基，由 GIBCOBRL 提供；胰酶, 由 SIGMA 公司提供；二甲基 亚 砜（ DMSO） ,由 SIGMA 公司提供；其他试剂：D-Hanks 液、三蒸水、MTT 等均为自行配制，其余试剂均为分析纯。
式（ 1） 中 ，C—细 胞 密 度 ， 单 位 为 个 每 毫 升（ 个 /ml） ；n—计数板四角大格内细胞总数，单位为个。
根据实测细胞密度， 加入适量细胞培养液配制 成浓度为 1×104/ml 的细胞悬液备用。
（ 5） 试验方法 将 配 制 好 的 1×104/ml 细 胞 悬 液 接 种 于 96 孔 培养板，设空白对照、阴性对照、阳性对照和供试品 组，每组各设 6 孔，每孔接种 100μl 细胞悬液 。 置 CO2 培养箱 （ 含体积分数 5%二氧化碳气体） 37℃培 养 24 小时后，弃去原培养液。 空白对照组加入新鲜 细胞培养液，阴性对照组加入阴性对照品浸提液，阳 性对照组加入阳性对照溶液， 供试品组加入试验样 品浸提液，每孔 100μl，置 CO2 培养箱继续培养 72 小时，置显微镜下观察细胞形态。 每孔加入 20μl 浓 度为 5g/L 的 MTT 溶液，继续培养 4 小时，弃去孔内 液 体 ，每 孔 分 别 加 入 150μl DMSO（ 二 甲 基 亚 砜） ， 振 荡 10 分 钟 后 ， 在 酶 标 仪 上 用 双 波 长（ 570nm、 630nm） 测定吸光度，计算即得相对增殖度（ RGR） 。
的 吸 胀 系 数 得 出 的 浸 提 比 例 为Ⅱ型 0.1g∶8ml，Ⅲ 型 0.1g∶11ml。
供试液制备全过程都在净化工作台中进行，保 证无菌操作。
（ 4） 细胞悬液制备 将已培养 48—72h 生长旺盛的细胞用消化液消 化后加入细胞培养液，吸管吹打混匀后用血球计数 板在显微镜下计数，按下式计算细胞密度：
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Medical Sterile Dressing；Tetrazolium Salt (MTT) Colorimetric Method；Cytotoxicity
０ 引言
的不断改进与发展。 现在人们对医单纯的 在不断增加， 所以相对对各种医用敷料的生物学安
the cell toxicity effect. Method：Using tetrazolium salt (MTT) colorimetric method in cell toxicity test. Result：
Area extraction to the liquid cell toxicity for level 3, quality extraction to the liquid cell toxicity to level 2. Conclusion：Using the mass extraction to the liquid ratio area extraction to the liquid cell toxicity small.
医
用
无
菌
医用无菌敷料细胞毒性的检验方法
敷
料
细
Ｓｔ ｕｄｙ ｏｎ ｔ ｈｅ Ｍｅｄｉ ｃａｌ Ｓｔ ｅｒ ｉ ｌ ｅ Ｄｒ ｅｓ ｓ ｉ ｎｇ Ｃｅｌ ｌ Ｔｏｘｉ ｃｉ ｔ ｙ Ｔｅｓ ｔ Ｍｅｔ ｈｏｄｓ
胞
毒
性
罗丹 洪燕
的
Luo Dan Hong Yan
检 验
（ 江西省食品药品检验所， 江西 南昌 330029）
方
（ Jiangxi Institute for Food and Drug Control， Jiangxi Nanchang 330029）
法
摘 要：目的：比较医用无菌敷料不同浸提方法所获得的供试液对其细胞毒性的影响。 方法：采用四唑盐 （ MTT） 比色法进行细胞毒性试验。 结果：面积浸提法得供试液细胞毒性为 3 级，质量浸提法得供试液细胞毒 性为 2 级。 结论：采用质量浸提法得供试液比面积浸提法得供试液的细胞毒性小。