铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。
罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。
1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。
1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。
1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。
曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。
张治国等研究了6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明，l /2 MS 是原球茎增殖的适宜培养基。
2.2 激素适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。
唐桂香等以1 / 2 MS 为基本培养基，发现BA 1.0mg/L和NAAO.lmg/L有利于原球茎诱导增殖。
蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。
蒋波等以1 / 2MS 为基本培养基.添加BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L或6 一BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L的激素，原球茎的增殖系数较大。
陈兆贵等认为原球茎增殖以MS + NAA1.0mg/L + 6 一BA1.0mg/L +KT1.0mg/L为最佳，35d 增殖倍数达到5 倍。
2.3 天然添加物椰子汁、苹果汁对原球茎的增殖有较好的效果，但香蕉汁对原球茎的增殖有抑制作用。
张治国等认为原球茎增殖时最好不添加任何天然提取物。
2.4 炭源添加活性炭能使原球茎的增殖量显著增加，这可能是活性炭吸附了某种不利于原球茎增殖的物质，蔗糖浓度0.5 ％~0.3 ％。
周根余等比较了不同炭源对铁皮石斛原球茎生长的影响，发现原球茎在蔗糖中生长最快，浓度3 % ，葡萄糖中其次，而乳糖中最慢。
3 原球茎分化3.1 基本培养基铁皮石斛原球茎分化可以1 / 2 MS，MS 等作为基本培养基。
张治国等比较了VW 、N6、l / 2MS 、B5、KC 等6 种基本培养基对原球茎分化的影响，发现6 种基本培养基附加马铃薯提取液和植物激素后，原球茎均可分化，但以1 /2MS 培养基作为原球茎分化的基本培养基最适宜，叶色浓绿，出苗整齐，这与刘瑞驹等困的报道一致。
3.2 激素培养基中添加BA 和NAA 后可加快原球茎分化的进程。
张治国等报道了BA 和NAA 不同的组合及浓度对原球茎分化的影响，在分化前期（40d ) ，高浓度的BA 和低浓度NAA 组合，加快原球茎分化进程，1 一2 片叶的分化苗占50 ％以上，以2mg/L BA 和0.2mg/L NAA 组合最好。
培养到60d 后NAA 浓度高的组合，分化苗整齐．尤其是0.2mg/LBA 和2mg/LNAA 组合，小苗生长发育快。
蒋波等报道以1 / 2 MS 为基本培养基，添加BA2.O mg/L + NAAO.2 mg/L或BA3.Omg/L十NAAO.2mg/L的激素，有利于原球茎的分化。
陈兆贵等以MS + NAA1.Omg/L + 6 一BAmg/L + KT1.0mg/L为培养基，45d 原球茎分化率达84 ％。
罗吉凤等认为原球茎分化适宜的培养基为1 / 2MS 十BA2mg/L+ NAA 0.2mg/L十IBAO.1mg/L＋蔗糖3%。
唐桂香等研究发现，BA 对原球茎诱导芽影响大，而NAA 对原球茎诱导芽影响小。
3.3 天然添加物土豆汁、马铃薯提取液能有效促进原球茎的分化，香蕉汁对原球茎的分化有抑制作用。
3.4 炭源培养基中加人活性炭能促进原球茎的分化际。
张治国等研究了蔗糖浓度对原球茎分化的影响，发现蔗糖为2 ％时，分化率为100 % ，此时原球茎的增殖率达最高，当蔗糖为3 ％时，原球茎不再分化，且增殖率随蔗糖浓度的增高而下降。
这可能是因为培养基的渗透压过高，抑制了原球茎的分化和生长。
故在原球茎分化中，蔗糖浓度以3 ％为分化的临界值，而蔗糖2 ％为原球茎分化的适宜浓度。
4 生根与壮苗4.1 基本培养基铁皮石斛试管苗生根壮苗常用的基本培养基有1/2 MS、MS、B5、N6等。
赵天榜等研究N6、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚苗生长的影响，以从最好，SH 、MS 次之，1 / 2MS 、1 / 2VW 最差。
张玲等比较了MS 、B5、N6 、KC 四种培养基对幼苗生长的影响，发现N6培养基最有利于幼苗的生长，其株高和根数都比其它培养基好，B5次之。
刘弊等比较了1 / 2 MS 、B5、VW 、KC 等4 种基本培养基对试管苗生长的影响，发现培养到120d 时，残培养基上的小苗生长最好，其次为l /2MS 培养基，而KC 和VW 培养基上的试管苗生长明显不如B5和1 / 2 MS 。
4.2 激素在基本培养基中添加NAA、IAA、IBA等激素有助于试管苗生根壮苗。
赵天榜等在1 / 2N6培养基内添加2mg/L或lmg/L NAA ，可提高石斛种胚苗分桑率6 . 00 一7.14 倍。
唐桂香等研究了不同NAA 含量对铁皮石斛苗成活率和生根的影响，结果表明NAA 有助于试管苗的生根，以0.5mg/L试管苗平均根数最多和平均根长最长。
4.3 天然添加物在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、孽葬汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
4.4 炭源铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长，能使根系长得更加粗壮闭。
唐桂香等认为在培养基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的根数和根长影响小。
5 其他外植体的离体培养除种子作外植体外，以铁皮石斛的茎尖、茎段、幼叶、种胚苗、幼根为外植体，均可培育出组培苗。
以茎尖、茎段为外植体，培养途径为茎尖、茎段一诱导形成不定芽～不定芽增殖～不定芽分化～生根壮苗，形成完整试管苗。
关于铁皮石斛组织培养与栽培技术的报告1培养基1.1配方根据不同阶段，培养基配方有所差异。
如表1表1 各种培养基配方不同阶段培养基备注愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗 MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.61.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA（1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；（2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；（3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml 蒸馏水的烧杯，混合均匀；（4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；（5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；（6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。
注意事项①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序；③煮沸时，小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
1.3灭菌1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0℃。
10min后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
表2 灭菌时间统计阶段单锅灭菌（耗时64min）多锅连续灭菌第一锅（耗时63min）第二锅（耗时46min）起始22:21 8:04 9:30排气22:41 8:23 9:43T=121℃22:50 8:32 9:50关闭电源23:10 8:52 10:10 气压降至023:259:0710:16注意事项①启动灭菌前，应检查水位、电源、排气阀、安全阀、排气管等，确保正常；②灭菌锅底部应铺垫一层报纸，以防培养瓶机械破损；③灭菌电压不宜超过220V，否则灭菌锅会剧烈摇晃，造成不必要的损害和安全隐患；④当温度达到121℃后，调节电压至135V，并且时不时注意温度的变化，确保温度介于121-122℃之间；⑤气压降至0后，不宜立即揭盖；最好在5-10min后揭盖，这样才能缓和内外“气压和温度差”；⑥揭盖5-10min后，再转移锅内培养基，以免烫伤。
⑦每锅只能灭菌18瓶2转接2.1转接前准备1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；2.2转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。