微卫星不稳定MSI-H型
MSI 判 定 结 果
微卫星不稳定MSI-L型
MSI 判 定 结 果
微卫星稳定MSS型
MSI 检 测 试 剂 盒 优 点
基于MSI的NCI panel标准开发了适合中国人群的MSI检测系统；
采用多重荧光PCR技术，一次扩增和检测6个准单态性单核苷酸 微卫星基因座，其中5个与国外检测相吻合，另外增加了一个适合
微卫星等位基因现象。
主要机制： ①DNA多聚酶的滑动导致重复序列中1个或多个碱基的错配 ②MS同源重组导致碱基对的丢失和插入
背
景
介
绍
1993年，Altonen等首次发现，在HNPCC细胞中存在高频 率的MSI。目前已发现MSI的肿瘤主要有3类： 一类为HNPCC病人发生的结直肠癌、子宫内膜癌以及卵巢 癌,这一类肿瘤几乎都表现为MSI；
因素。
微卫星不稳定检测的意义
3. 检测MSI以判断是否需要辅助化疗
对于Ⅱ期结肠癌是否需要辅助化疗，在做临床决策时
需要考量的一个重要信息就是微卫星不稳定性
（MSI）。
研究认为MMR 基因为MSI-H（高度微卫星不稳定）会
对顺铂、卡培他滨及5-FU 产生耐药性，相反MSI-L、
MSS 的患者不会产生耐药。
DNA至少20μl）外，还需提供琼脂糖凝胶电泳图
MSI 检 测 试 剂 盒 使 用 方 法
DNA提取：根据样本不同，采用二甲苯或Chelex 100的方法提取 DNA；
组分
20 μl体系(μl) 6.0 8.0 4.0 2.0
PCR扩增：
Master Mix
无核酸酶超纯水 2.5×PCR Mix 5×MSI引物混合物 模板DNA
~90%
3-5天
500~1000
复杂
80~100%
高
高
5-7天
1000~2000
简便
100%
高
高
2-3天
500~1000
简便
Microread MSI 检 测 试 剂 盒
阅微基因根据NCCN指南，针对结直肠癌基因诊断领域研发了MSI检 测的试剂盒。
微卫星不稳定（microsatellite instability，MSI）检测试剂盒 是一款以多重荧光PCR技术为基础的基因突变检测系统，一次扩增检 测6个MSI位点，操作简便、快速。
检测AZFb、AZFc区各常见部分缺失及复制；可同时对克氏综合症
进行检测。
21三体综合征检测试剂盒
周期短、准确性高、灵敏度高、可清晰判断样本污染情况、对 于部分易位和嵌合体有更好的检出率
中确保含有9mm2以上大小的组织块）10片或以上，注明石蜡 包埋组织的保存年限，组织类型和包埋前处理方式等。 若客户提供DNA样品，则从新鲜组织提取的DNA最佳， 20ng/μl以上的DNA 20μl即可（需提供DNA浓度）；若为石蜡 包埋组织提取的DNA，除了提供DNA的浓度（20ng/μl以上的
白血病BCR-ABL1检测试剂盒 检测三种最常见BCR-ABL1变体；可进行绝对定量；灵敏度达10-5；
整合ARQ技术，检测结果稳定、准确；成本较低。
阅 微 基 因 诊 断 试 剂 简 介
Y微缺失检测试剂盒
操作简便；8小时内得到结果；模版需要量低；检测位点包含 EAA/EMQN指导意见位点；每个样品只需一个扩增检测反应；可
测指标。
微卫星不稳定检测的意义
1. 检测MSI可以用于检测是否为Lynch综合征
结直肠癌的遗传易感性包括一些研究较清楚的遗传性
综合征，例如Lynch综合征（又称之为遗传性非息肉病
性结直肠癌，HNPCC）和家族性息肉病（FAP）。在
HNPCC 和散发性直肠癌中的微卫星不稳定性是遍布整
个基因组的现象，并且可能是导致癌症发生的普遍机
制。
微卫星不稳定检测的意义
专家组推荐， MMR蛋白检测应强烈建议在所 有50岁以下的结肠癌患者中开展，原因在于该 群体中患Lynch综合征的可能性增加。而且，在 一些中心，现在对所有的结直肠肿瘤组织进行 免疫组化检测（有时分析MSI）以来决定哪些患
者需要进行Lynch综合征相关的基因检测.
微卫星不稳定检测的意义
扩 点
增
位点 NR-27 NR-21 BAT-26 BAT-25 NR-24
检
测
位
重复序列 (A)27 (A)21 (A)26 (A)25 (A)24 (A)27 (AAAAG)3-15 (AAAAG)2-17 产物范围1 70-91 92-113 160-185 105-125 119-139 155-177 190-250 151-224 107/113 标记荧光类型 HEX FAM FAM HEX TMR TMR FAM HEX TMR
微卫星不稳定检测的意义 一项研究长期随访了Ⅱ/Ⅲ期结肠癌
患者后发现，MSI-L或MSS者通过5-FU辅助
化疗确实改善了预后；然而，MSI-H者却
不能从术后5-FU辅助化疗中显著获益，与
单纯手术相比，5-年生存率反而更低。
MSI 检 测 方 法
1. 免疫组化方法(IHC) 免疫组化方法仅用于与肿瘤细胞中的MLH1, MSH2, MSH6和PMS2蛋白结 合。如果没有结合任何的蛋白，就证明发生了MSI。
反应总体积
20.0
毛细管电泳检测：按照[（0.5μlROX500）×样品数]+[（8.5μl甲酰 胺）×样品数]制备好样品，RUN 3130xl遗传分析仪。
操 作 流 程 示 意 图
数 据 分 析
目的峰：
A. 单核苷酸标记的位点NR21、Bat26、NR27、Bat25、NR24、 Mono27的峰型均为类似五指的手掌峰，见图2；
另一类为散发性结直肠癌,这一类肿瘤发生MSI概率约15
％ ～30％； 第三类为包括肺癌、乳腺癌和胰腺癌在内的其它肿瘤,这 一类肿瘤MSI发生频率相对较低。
背
景
介
绍
结直肠癌是是常见的消化道恶性肿瘤，我们每 年有13万-16万人罹患结直肠癌，其发病率占肿瘤 发病率的第三位，仅次于肺癌和胃癌。 HNPCC是常见的遗传性肿瘤综合症，遗传性结 直肠癌是一个常染色体遗传疾病,目前研究表明微
图2 单核苷酸标记位点峰型示意图
数 据 分 析
B. 五核苷酸重复的位点Penta C、Penta D和性别位点Amelogenin 的峰型均为单峰型，见图3。
图3 五核苷酸标记和性别位点峰型示意图 非目的峰：pull-up峰、stutter峰、染料峰、加A不完全峰等。
MSI 判 定 结 果
根据NCI建议，与正常样本比较，有2个发生改变可称定为MSI-H型， 只有1个出现不稳定的为MSI-L型，没有出现突变的情况为MSS型。
MSI 检 测 案 例
13MS6C
13MS6E
* 接收委托方两份检材，分别为肿瘤组织13MS6C和正常组织13MS6E，要求检测该肿瘤组 织的MSI状态，6个单核苷酸位点均未出现MSI，鉴定结果为MSS稳定状态。
阅 微 基 因 诊 断 试 剂 简 介
脆性X综合征检测试剂盒 五种特性检测脆性X综合征：准确计算CGG重复数、灵敏度高于 Southern杂交、可识别女性纯合子及杂合子、检测AGG插入、结果 100%可重复。
2. 检测MSI可以用于判断患者预后 高危Ⅱ期患者，定义为预后较差者，包括：T4（ⅡB、 ⅡC期）、组织学分化差（3/4级，不包括MSI-H者）， 已经有大量证据表明MMR蛋白表达缺失或MSI-H是Ⅱ
期结肠癌预后良好的一个标志物。具有MSI-H肿瘤的Ⅱ
期结肠癌患者，3/4级分化（低分化）不再认为是高危
中国人群的位点；
基于测序仪的基因分型研究领域拥有多年的经验和多项成果，
已经做了超过1000例病例样本，积累了丰富的经验和数据基础。
MSI 检 测 案 例
XBH-X
XBH-1
* 接收委托方两份样本，正常组织XBH-X和肿瘤组织XBH-1，要求鉴定肿瘤组织的MSI状态， 正常对照样本分型正确，肿瘤组织样品在BAT-26、NR-27、BAT-25、NR-24和MONO-27等5 个位点出现双峰。该肿瘤组织为MSI-H型。
2. 直接测序法
对MMR基因各区域（MLH1、MSH2、MSH6等）的扩增产物直接测序。 3. 多重荧光PCR
采用多重荧光PCR的方法对NCI建议的位点进行扩增，以确定MSI状态。

检 测 MSI 方 法 比 较
方法
灵敏度
特异 性
低
重现 性
低
时间
成本
Hale Waihona Puke 操作IHC 直接测序 法 多重荧光 PCR
GenBank® Number AF070674 XM_033393 U41210 L04143 X60152 AC007684 AL138752 AC000014 -
MONO-27 Penta C Penta D Amel
MSI 检 测 送 样 要 求
若客户提供石蜡切片，则要求厚度5-20μm的石蜡切片（切片
卫星不稳定性可能是遗传性结直肠癌发生的重要
机制。
背
景
介
绍
具有MSI的散发性结直肠癌,具有不同的临床病理、
分子生物学特征,表现为:发病年龄较小；对某些化疗
药物(如5-FU、顺铂等)有原发性耐药; 生物学行为较
好。
MSI-H是Ⅱ期结肠癌预后良好的一个标志物，也
是患者不能从氟尿嘧啶单药辅助化疗获益的疗效预
基因的概念
MSI诊断检测的方法和应用
主 要 内 容
微卫星不稳定的相关背景 MSI的检测意义 MSI检测方法 MSI检测试剂盒
背 绍
景
介
微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI) 是指与正常组织相比，在肿瘤中某一微卫星由于重复单位 的插入或缺失而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的