25
90
AAGGAAAAAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA
25
>90
Nsi I
TGCATGCATGCA CCAATGCATTGGTTCTGCAGTT
10
>90
>90
>90
Pac I
TTAATTAA GTTAATTAAC CCTTAATTAAGG
0
0
0
25
0
>90
Pme I
GTTTAAAC GGTTTAAACC GGGTTTAAACCC AGCTTTGTTTAAACGGCGCGCCGG
CATCGATG GATCGATC CCATCGATGG CCCATCGATGGG
GGAATTCC CGGAATTCCG CCGGAATTCCGG
GGGGCCCC AGCGGCCGCT TTGCGGCCGCAA
CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG
切割率%
2 hr
20 hr
0
0
10
25
0
10
Sac I Sac II
CGAGCTCG
GCCGCGGC TCCCCGCGGGGA
10
10
0
0
50
>90
Sal I
GTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC
0
0
GCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCGG
10
50
ACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCG
10
75
GAA
Sca I Sma I Spe I Sph I Stu I Xba I Xho I Xma I
GAGTACTC AAAAGTACTTTT
CCCGGG CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA
GACTAGTC GGACTAGTCC CGGACTAGTCCG CTAGACTAGTCTAG
CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC
GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA
GGGT(A/T)ACCC
AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
0
0
0
25
0
50
75
>90
Pst I
GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA
0
0
10
10
AACTGCAGAACCAATGCATTGG
>90
>90
AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA
>90
>90
CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
0
0
Pvu I
CCGATCGG ATCGATCGቤተ መጻሕፍቲ ባይዱT TCGCGATCGCGA
基（黑色），相同如果要在 3‘端加保护碱基，就在酶切位点识别碱基序列（红色）
的 3’端加上相应的碱基（黑色）。
2．切割率：正确识别并酶切的效率
3。加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基。
GGCATGCC CATGCATGCATG ACATGCATGCATGT
AAGGCCTT GAAGGCCTTC AAAAGGCCTTTT
CTCTAGAG GCTCTAGAGC TGCTCTAGAGCA CTAGTCTAGACTAG
CCTCGAGG CCCTCGAGGG CCGCTCGAGCGG
CCCCGGGG CCCCCGGGGG CCCCCCGGGGGG TCCCCCCGGGGGGA
>90
>90
0
0
0
0
10
75
Kpn I
GGGTACCC GGGGTACCCC CGGGGTACCCCG
0
0
>90
>90
>90
>90
Mlu I
GACGCGTC CGACGCGTCG
0
0
25
50
Nco I
CCCATGGG CATGCCATGGCATG
0
0
50
75
Nde I
CCATATGG CCCATATGGG CGCCATATGGCG GGGTTTCATATGAAACCC GGAATTCCATATGGAATTCC GGGAATTCCATATGGAATTCCC
酶切位点保护碱基
Revised at 2 pm on December 25, 2020.
酶 Acc I Afl III Asc I Ava I BamH I Bgl II BssH II BstE II BstX I Cla I
EcoR I Hae III Hind III
PCR 设计引物时酶切位点的保护
0
0
0
0
0
0
0
0
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
50
>90
>90
>90
>90
>90
10
25
>90
>90
>90
>90
0
0
75
>90
25
>90
0
0
0
0
50
>90
0
10
0
0
25
50
25
>90
0
0
0
0
>90
>90
50
50
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
>90
10
25
75
75
0
10
0
10
10
50
>90
>90
10
>90
10
>90
0
50
0
50
0
0
0
25
10
50
>90
>90
>90
>90
>90
>90
0
0
>90
>90
75
>90
75
>90
0
0
10
25
10
75
0
0
25
75
50
>90
>90
>90
注释：
1．如果要加在序列的 5‘端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的 5’端加上相应的碱
寡核苷酸序列
GGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG
CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG
GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA
CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA
CGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCGCG
0
0
0
0
0
0
0
0
75
>90
75
>90
Nhe I
GGCTAGCC CGGCTAGCCG CTAGCTAGCTAG
0
0
10
25
10
50
Not I
TTGCGGCCGCAA ATTTGCGGCCGCTTTA
0
0
10
10
AAATATGCGGCCGCTATAAA
10
10
ATAAGAATGCGGCCGCTAAACTAT