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①固定相厚度。②展开距离。③展开容器中展开剂蒸汽的饱 和程度。④样品量。⑤操作时的环境湿度和吸附剂含水量。
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4. 相对比值（relative retardation factor，Rst）
Rst是在一定条件下，待测组分比移值（Rf(i)）与参考物质比
移值（Rf(s)）之比：
Rst

R f (i) R f s
4、防止展开剂脱混
易脱混：多元溶剂极 性差别大，极性溶剂 13 比例小
5、多元溶剂系统展开剂 不可重复使用
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图示
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1、制板（四）TLC的实验操作
– 固定相：硅胶(硅胶H、硅胶G、硅胶GF254)、Al2O3、纤维 素、聚酰胺、葡聚糖凝胶、硅藻土等
– 载板：软板(聚酯薄膜)、硬板(玻璃板) – 粘合剂：CMC-Na 0.3～1%，常用0.5% – 铺板方法
– 边缘效应：即同一种组分在同一块板上，处于边缘的点 的Rf值大于中心点。
• 原因：a、边缘处溶剂挥发快；b、多元溶剂时，易挥发溶 剂在边缘挥发快，从而难挥发溶剂（极性大）相对比例大，
洗脱能力强，使斑点移动快。
（3）展开方式
上行法、下行法、水平展开。
（4）特殊展开技术
连续展开（相当于增加展开距离） 单向多级展开 双向展开 分级展开（自动多步展开仪）
平面色谱法与柱色谱法的分离机理基本相同，操作方式有所区别。 经典柱色谱法的固定相填充于柱管中，流动相靠重力作用流经固定
相，分离过程称为洗脱，流动相也称洗脱剂； 而平面色谱固定相涂布于平面载板上或以纸纤维为平面载体，流动相
通过毛细作用流经固定相，分离过程称为展开，流动相也称展开剂。
本节主要介绍薄层色谱法4 与纸色谱法。
（2）控制斑点大小：一般在2～3mm
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3、展开 • （1）饱和展开
– 饱和展开箱展开是指在展开前，箱内的各种气液达到平衡（饱 和），展开过程中，薄层上的溶剂不再蒸发，重现性好。
• （2）不饱和展开
– 不饱和展开箱展开是指展开箱中气体与溶剂蒸气、薄层未达到 动态平衡时即开始展开；展开过程中，薄层上的溶剂不断地在 薄层表面上蒸发，从而造成结果重现性差及边缘效应
选择吸附剂主要依据样品的性质如：极性、酸碱 性、溶解度等
氧化铝一般适用于碱性和中性物质的分离 硅胶微带酸性适用于酸性和中性物质的分离
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12
（三）展开剂的选择
1、原则：要同时考虑固定相、流动相、 被分离物质的性质。
2、选择合适的Rf值（据展开剂极性） 3、选择较好的选择性（据溶剂 的三角形分类）
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4、检出 显色、定位
有色物质直接定位。
无色物质 紫外光下定位（λ254，365）。
荧光定位：发射荧光的物质

在荧光背景下显暗斑的物质（荧光熄灭）
显色定位（化学显色）
I2蒸气（棕黄色）
浓硫酸/MeOH（1:1）或10% 喷雾后，110℃烘烤21
H2SO4-乙醇溶液
专属显色剂
喷雾：人工、机械

Li Ls
式中中心，距离Li，。Ls分别为原点至待测组分i和参考物质s斑点
Rst与Rf相比具有更好重现性和可比性。参考物质可以 选择纯物质加到试样中，也可7 以是试样中的某一已知组
分。Rst可以大于1，也可以小于1。
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三、薄层色谱
固定相涂布于平面载板上，流动相通常是借 毛细管作用流经固定相，使被分离后的物质保留在 固定相上。— 开放式的离线操作。见图示
若组分k为0，其Rf = 1，表示该组分完全不被固定相保留； 若k为无穷大，其Rf = 0，表示该组分在流动相中浓度为0，
完全被固定相保留，停留在原点，不能被展开。
3. 影响Rf值的因素
影响最大的是固定相、流动相、组分的性质及温度等，
此外，当用同一种固定相、流动相系统时，被测物质Rf 值
还受下列因素的影响：：
定性分析— 窄条 定量分析— 10×20cm
硅胶G：自含粘和剂
硅胶H：不含粘和剂，铺板时另加入 CMC
硅胶HF254：含荧光剂，254 nm 紫外光照发绿
光
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硅胶HF365：含荧光剂，365 nm 紫外光照发光
表11-3
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2、点样
（1）控制点样量，防止拖尾1-10μL
点样量 = 样品溶液浓度×点样体积
特点
适用于微量分析（微克级）；
仪器简单，操作方便，灵敏度高，分析快速；
具有多路柱效应，可同时平行分离多个样品；
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分离样品所需展开剂少，节约溶剂，减少了污染
薄层色谱（TLC）
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next
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（一）概述
1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板
上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法
• 倾注法、浸渍法、机械涂布（自动、手动）（图示）、喷 涂法
– TLP的干燥:先自然干燥，后烘干活化
• 自然干燥时要阴干，否则吸附剂外孔间大量溶剂急剧 挥发，溢出薄层面破坏表面平整，或由于突然受热引 起薄层局部收缩龟裂。
– 板的厚度 • 分析用：0.3～1mm；制备用:1～2mm
‫٭‬back
预制板
2．操作过程：见图示
铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/ 洗脱(定量)
3．分类：分离机制 吸附、分配、离子交换、空间排阻
经典薄层色谱（TLC）、高效1薄0 层色谱（HPTLC）、胶束薄 层色谱（MTLC）
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（二）吸附剂的选择
根据被测物极性和吸附剂的吸附能力
被测物极性强——活性低的吸附剂 被测物极性弱——活性高的吸附剂
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二、平面色谱基本原理
1. 比移值（retardation factor；Rf）
实际操作中，待测组分Rf 在0.2 ~ 0.8 为宜。
2. Rf与k的关系
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Rf
L L0

L/t L0 / t

r u

R
1 1 k
图12-8 平面色谱展开示意图
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可见Rf即柱色谱中的保留比R。
组分的k↑，在薄层上移动速度↓，Rf ↓ 。
第十二章 经典液相色谱法（LC）
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经典液相色谱法 LC
吸附色谱法
平面色谱法
• 薄层色谱法 纸色谱法
分配色谱法
聚酰胺色
离子交换
谱法
色谱法
凝胶色谱2 法（分
子排阻色谱法）
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1. 平面色谱法概述 2. 平面色谱法基本原理 3. 薄层色谱法 4. 纸色谱法
第六节 平面色谱法 3
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一、平面色谱法概述
平面色谱法是指固定相呈平面状态的色谱法。