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动物转基因技术
Animal transgenic technique
二、实验动物设施
实验动物设施：指与实验动物和动物实验 有关的实验动物的保种维持、生产、实验、 研究等所需的建筑物和设备的总称。
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1、实验动物设施的一般组成
饲育室、实验室、检疫室、洗刷消毒间、废 物处理设施、办公室、机房、库房等。
1、气候因素
（1）温度 18℃- 29℃ ● 影响生长发育和繁殖 ● 影响代谢 ● 激发应激反应 ● 影响试验结果。
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温度与毒性的关系
温度对3种药物LD50的影响
药物 苯异丙胺
LD50（mg/kg）
15.5℃ 26.7℃
197.0
90.0
盐酸脱氧麻黄碱 111.0
33.2
麻黄碱
477.1
565.0
特点： 1）保持一定的杂合性 2）保持相对稳定的遗传 特征 3）繁殖力、抗病力强、 生产成本低
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二、按微生物学控制原理分类
按照对微生物净化的程度，实验动物在我国分为四类: 普通级动物(CV) 清洁动物(CL级) 无特定病原体动物(SPF) 无菌动物（包括悉生动物、GF/GA)
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1、无菌动物
概念：机体内、外不带有任何现有方法可检测 出微生物和寄生虫的动物。 应用：（1）用于微生物学和寄生虫学研究
实验；（2）各种疫苗生产 。
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3．清洁动物
概念：指来自屏障系统的SPF动物，而饲育在半屏障 环境设施系统中的动物。 应用：一般用于短期、中期对带菌要求不严格的实 验研究。
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4. 普通动物
概念：是未经积极的微生物学控制，普遍地 饲养在开放卫生环境里的动物。 应用：教学、一般性实验、预实验
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肥胖小鼠
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3．杂交群动物
概念：是两个近交品系动物间有计划进行交配获 得的第一代动物，亦称杂交一代，简称Fl动物。
特点：F1动物基因型相同，个体基本相同，表现 型变异低，适应性强，反应敏感及分布广等特点，并 具有双亲共有的遗传特性。
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4．封闭群动物
概念：指一个动物种群在5年以上未从外部引进 其它任何新血缘品系，是由同一血缘品系进行随 意交配，并在固定场所保存繁殖的动物群。
（2）免疫学功能的研究 （3）用于老年病学研究
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悉生动物
概念：指在无菌动物体内植入已知微生物的动物。 应用： （1）微生物学研究
（2）免疫学研究 （3）抗体制备研究
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2．无特定病原体动物
概念：指实验动物体内不存在特定病原微生物和 寄生虫的动物，简称SPF动物。 应用：（1）国际上公认SPF动物适用于所有科研
2、繁殖原则
封闭群应足够大，并尽量避免近亲交配。
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四、杂交群的培育
采用两个近交系进行杂交而形成。
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一、鼠的准备与要求
第四节 超排卵与取卵
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二、超排卵与取卵
1、排卵程序： (1) 第一日中午先向小鼠腹腔内注入5一l0单位的PMS； (2) 过48小时腹腔内注入5—10单位的人hCG(注射后11—13 小时后排卵)； (3) 令雌雄动物一对一的合笼交配； (4) 检查阴栓(第四日晨)；检查阴栓可判定是否受精；如已 受精则出现阴栓。
—犬种
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二、按遗传学控制原理分类
1．近交系动物
概念：是采用兄妹交配或亲子交配，连续繁殖20代以上 培育而成的纯品系动物。
特点： ① 具有相同的基因型，表现型也一致
② 遗传背景明确 ③ 长期遗传稳定性
C57BL
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2．突变系动物
突变系动物是指正常染色体的基因发生了变异的， 形成具有各种遗传缺陷的动物。
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（3）亚屏障系统（Sub-Barrier system）
介于屏障系统和开放系统的中间状态的设施， 其构造和设备均基本上按屏障设施的标准要求， 空气经亚高效过滤，在管理上没有屏障系统那么 严格，用于清洁级动物的生产和实验。
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（4）隔离系统（Isolator system）
饲养无菌动物及悉生动物所使用的方式，它 能保证动物处于完全无菌的环境下，主要设备是 隔离器，可以放在普通环境中。
门窗：门应坚固、气密性好、耐腐蚀、易清洗， 开闭形式顺应气流密封，门下端设连动装置，关 闭时门底不留缝隙，门宽不少于1.0m，门上可留 玻璃观察窗。
走廊：宽度一般为1.5～2.0m。 房间：为节约能源，饲mal transgenic technique
2、实验动物设施的等级
开放系统 亚屏障系统 屏障系统 隔离系统
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（1）开放系统（Open system）：饲养普通动物的 设施，在某种程度上对卫生有要求。
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（2）屏障系统（Barrier system）： 为努力避免与病原微生物接触和传染的机会而设计
的封闭设施，适合饲养清洁动物或SPF动物。
实验用动物
指一切用于科学实验的动物。
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一、在动物学上的分类 人为分类法 自然分类法
界（Kingdom）
动物界
—门（Phylum）
—脊椎动物门
—纲（Class） —目（Order） —科（Family） —属（Genus） —种（Species）
—哺乳纲 —真兽亚纲 —食肉目 —肢脚亚目 —犬科 —犬属
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第二节 实验动物的饲养条件与环境控制
实验动物环境
外环境 内环境
大环境 小环境
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实验动物环境控制与动物实验结果的关系
基因型
发育环境
周围环境
表现型
演出型
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一、影响实验动物环境的因素
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2 受精卵的收集
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Thanks
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缺点：选择范围小，由于只有单线的仔代，有断 代的危险。
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3、优选法
在基础群中，每代有5 对，繁殖过程中，每一代均 保持5对向下传递，当某对 不孕或生产能力降低时，可 从另一对所生的后代中选择 优良者代替。它兼有以上两 个方法的优点。
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转基因动物第二章实验动物的饲 养与培育分析
1 实验动物的分类
主
要
2 实验动物的饲养条件与环境控制
内
容
3 实验动物的育种
4 超排卵与取卵
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第一节 实验动物的分类
实验动物
经人工培育，遗传背景明确，来源清楚，对其携带微生 物和寄生虫实行监控，应用于生命科学研究，药品、生 物制品的生产和检定，以及其它科学研究的动物。
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（2）湿 度 40%-70% （3）风速 0.1-0.25m/s
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2. 理化因素
（1）粉尘：粉尘的标准，以净化的洁净度分为 清洁级动物为100000级，SPF动物为10000级，无 菌动物为100级。
（2）有害气体：主要有氨、甲基硫醇、硫化氢 等。氨控制在14 mg/m3以下。 （3）噪音：≤60 db
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3、实验动物设施的基本要求
（1）区域的设置
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（2）对部分建筑部位的要求
地面：应防滑、耐磨、耐清洗消毒、无渗漏。 地漏：屏障区内地漏应防堵、防回水回气，采用
特制盖、可水封。 墙面：应光滑平整，阴阳角为圆弧形，墙面应采
用不易脱落、耐腐蚀、无反光、耐冲击、无缝隙 的材料。
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天花板：应采用耐水洗、耐腐蚀、气密性好、坚 固、无毒、阻燃的材料。
二、突变系的培育
■ 通过培育近交系的方法使突变基因保存下来
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■ 将突变基因导入近交系
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三、封闭群的培育
封闭群动物的繁殖是尽量保持封闭群动物基 因异质性及多态性，避免随繁殖代数增加，导致 近交系数的过快上升。
1、随机交配的方法 （1）按随机数表配对法
将断奶后的实验动物编号，按随机数表组 成配种对。
第三节
一、近交系的培育
实验动物的育种
1、平行线法
由5个家系组成基础繁殖群， 从每个家系中选出一对兄妹进 行全同胞交配，以此类推，最 后有可能育成5个亚系。
缺点：个体不太均一、易发生分化
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2、单线法
以某个家系为基础繁 殖对，在其后代中一 般选留3-5对兄妹，但 仅有1对向下传递，生 产的个体均一，最后 形成单一的品系。
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（2） 分组交叉交配法
雄鼠组号
1 2 3 4
子代组号
A B C D
雌鼠组号
1 2 3 4
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（3）循环配对法
n 代 公1 母 公 2 母 公 3 母 公 4 母 公 5 母 n＋1代 公 1 母 公 2 母 公 3 母 公 4 母 公 5 母
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2、封闭群的维持与生产 （1）引种原则
① 遗传背景明确，来源清楚，有完整资料。 ② 引种动物数量要足够多。
（4）光照：明暗交替时间为12:12或10:14
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3. 生物因素
（1）饲养密度和社会因素 大约是每平方米小鼠100只、大鼠50只、豚鼠20
只、兔4只、狗1只、猴1只。
饲养空间狭小
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（2）空气中的微生物
常常以空气落下菌数表示，普通环境小于 或等于30个/皿，屏障环境小于或等于3个/皿， 隔离环境无检出。