“无病毒苗”----是指不含该种植物的主要 危害病毒，即经检测主要病毒在植物内 的存在表现阴性反应的苗木。
第一节 脱毒方法
一、茎尖培养脱毒 （一）茎尖培养脱毒原理 1、病毒在植物体内的分布
越靠近茎顶端区域的病毒，其感染深度越 低，生长点(约0.1～1.0mm区域)则几乎不含 或含病毒很少。离尖端越远病毒浓度越高。
无病毒苗的保存 隔离保存：种植于防虫网室 长期保存：
低温保存：茎尖或小植株培养基。19℃低温低光照，6-12月更换培养基。
冷冻保存：用液氮（-196℃）。
无病毒苗的繁殖 嫁接繁殖 扦插繁殖 压条繁殖 匍匐茎繁殖
本章小结
去除植物病毒的方法:热处理法、微茎尖培 养法、愈伤组织培养法和茎尖微体嫁接法。
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花药脱毒
1974年日本大泽胜次首次发现，草莓 花药培养可产生无病毒植株。
草莓花药培养脱毒率高于茎尖脱毒 率，一般可达80%以上。
三、理化方法脱毒
1、物理方法： 高温处理，又称温热疗法。35-40℃一些病
毒钝化失活。 低温处理，又称冷疗法。5℃处理4-7个月
2、化学处理 病毒抗血清预处理 RNA合成抑制剂处理 病毒唑处理
2、取茎尖与接种
取芽放在无菌的垫有滤纸的培养皿中，在 解剖镜下，用刀剥去幼叶，露出生长点。 带1-3个叶原基的茎尖作外植体（约0.30.5mm。使用培养容器以保湿性好的为宜。
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3、培养 25℃左右；10-16h/d， 1500—50001x，2-3个月长绿点
4、生根诱导 2-3cm高的无根苗——生根培养基， 1-2个月生根
法之一。
四、分子生物学鉴定法
双链RNA法（dsRNA） 互补DNA（cDNA）检测法
五、电镜（elecmc microscope）检测法 原理：
人的眼睛难以观察小于0.1mm的微粒； 普通光学显微镜只能看到小至200μm的微
粒； 电子显微镜能分辨0.5μm大小的病毒颗粒。
优点：灵敏度高，是一种较为先进的 方法。
第二节 脱毒苗的鉴定
脱毒苗鉴定方法 直接检测法 指示植物法 抗血清鉴定法 分子生物学鉴定法 电镜检测法
一、直接检测法
直接观察脱毒植株 生长状态是否异 常，茎叶上有无特 定病毒引起的可见 症状。
二、指示植物（indmatingplant）法
定义： 将一些对病毒反应敏感、症状特 征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄 主），用以检验待测植物体内特定病毒的 存在。
第8章 植物脱毒技术
本章主要内容
脱毒方法 脱毒苗鉴定 无病毒苗的保存和繁殖
本章教学目的与要求
掌握植物茎尖培养脱毒的方法 一般掌握无毒苗的鉴定方法； 掌握脱毒苗在生产上的重要意义； 了解脱毒苗的保存和繁殖方法
培育无病毒苗的意义
用组织培养方法生产无毒苗，可减少病毒危 害，提高产量，对减少污染，防止公害，保 护环境都有积极的意义。
优点：方法简单，灵敏、准确、操作 简便，沿用至今，仍为一种经济而有 效的鉴定方法。
缺点：不能测出病毒总的核蛋白浓 度，而只能测出病毒的相对感染力。
鉴定方法 草本指示植物鉴定 木本指示植物鉴定
草本指示植物鉴定——汁液涂抹法
待测幼叶1-3g，加少量水及0.1mol/L磷酸缓 冲液磨成匀浆。在指示植物上涂上一薄层 500~600目金刚砂，用脱脂棉蘸匀浆在叶片 上轻擦，5min后水洗。适宜温度培养数天~ 数周，观察有无病毒感染的症状。
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草本指示植物鉴定——小叶嫁接法
鉴定方法 草本指示植物鉴定 木本指示植物鉴定
木本指示植物鉴定——嫁接法
在指示植物上嫁接待测植株的芽 双重芽嫁接 双芽嫁接法
三、抗血清（antisemm）鉴定法
利用特定病毒的抗血清，通过血清学反 应，即可检测该种病毒。
特点：专一性高，快速简便。 抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方
珠心胚培养脱毒
柑橘类为多胚种子，除合子胚外，还有多 个珠心胚-----培养----再生植株是无病毒。 因病毒一般不通过种子传播。
微尖嫁接脱毒
微பைடு நூலகம்嫁接技术（micrografting shoot-tip）： 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无 病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。
微尖嫁接脱毒主要程序：无菌砧木培养— 茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽
2、茎尖大小与脱毒效果
茎尖【顶端分生组织（生长点)】的大小与 脱毒效果成反比。
一般以带1-3个幼叶原基的茎尖（约0.30.5mm）做外植体较好。
（二）茎尖培养脱毒方法 1、取样与消毒 2、取茎尖与接种 3、培养 4、生根诱导
顶芽或腋芽，常规消毒
1、取样与消毒：取顶芽或腋芽3-5cm，剥去 大叶片，水洗干净，75%酒精浸泡30s，13%次氯酸钠或5-7%漂白粉10-20min，或 0.1%升汞10min。无菌水3-5次。
缺点：需一定的设备和技术。
马铃薯脱毒技术
危害马铃薯的病毒有17种之多， 如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A 病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。 马铃薯病毒可使块茎产量减少 50%~80%。
脱毒马铃薯——微型薯
脱毒试管苗
人工种子
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微型薯
第三节 无病毒苗的保存和繁殖
无病毒苗的保存 无病毒苗的繁殖
热处理法:分为温汤浸渍处理法和热处理法。
病毒主要分布于植物体成熟和衰老的组织 及器官中，靠维管束传播。由于茎尖尚未 形成维管束，所以茎尖一般是无毒的，可 用于组织培养无毒苗。
无毒苗的鉴定方法主要有：①指示植物鉴 定法；②抗血清鉴定法；③电子显微镜检 查法；④酶联免疫鉴定法。
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（三） 培养基与培养方式
培养基：MS、White等 培养方式：
一般采用半固体培养基 液体滤纸桥培养法更好
茎尖培养脱毒示意图
二、其他组织培养脱毒方法
愈伤组织培养脱毒 珠心胚培养脱毒 微尖嫁接脱毒 花药培养脱毒
愈伤组织培养脱毒
部分愈伤组织不带病毒---多次继代培养 后，病毒的浓度下降，甚至检测不出病毒。