搅拌5h
反应物装入透析袋
４℃对10%DMF透析１d
对蒸馏水透析4d ５ 取出反应物 分装 -20 ℃保存
• 思考题：
１ ２ ３ 小分子半抗原为什么要与载体蛋白先偶联才能 载体蛋白的选择原则。 半抗原与载体偶联时，因其所带基团的不同需 作为免疫原？
不同连接方法，试加以简述。
实验一
• 实验目的:
半抗原免疫原的制备
• 1 了解半抗原免疫原的合成方法及基本原理； • 2 将半抗原吲哚乙酸用混合酸酐法与载体蛋白牛 血清白蛋白偶联。
分子量: 175.18
吲哚乙酸
实验原理：
半抗原-载体连接方法3
Cl-COO-CH2CH(CH3)2
半抗原-COOH 半抗原-COO-COO-CH2CH(CH3)2
75µl三正丁胺
2mlN-N’二甲基甲酰胺(DMF)
40µl氯甲酸异丁酯 磁
力搅拌８分钟
２ 210mgBSA
形成IAA混合酸酐
11ml蒸馏水 11mlDMF
420µl1mol/lNaOH
搅拌
• 实验步骤：
３ 将IAA混合酸酐逐滴加入到BSA溶液中 200µl1mol/lNaOH
不断搅拌
继续搅拌1h ４
载体蛋白-NH2
半抗原-CO-NH-载体蛋白 ＋ HO-CH2CH(CH3)2
氯甲酸异丁脂法
• 试剂和仪器：
• 试剂：吲哚乙酸(IAA)，牛血清白蛋白(BSA)，三 正丁胺，N-N’二甲基甲酰胺(DMF)，氯甲酸异丁
酯，NaOH；
• 仪器：反应器，磁力搅拌器，微量加样器，滴管
等。
• 实验步骤：
１ 52.3mgI