液相色谱-四极杆/飞行时间质谱联用（HPLC-QTOF）一、开机1.打开计算机，LAN Switch电源。

2.打开液相各个模块电源，打开质谱前面的电源开关，等待大约两分钟，当听到第二声溶剂阀切换的声音(表明质谱自检完成)后，仪器可以联机。

3.在计算机桌面上双击MassHunter采集软件图标，进入MassHunter工作站。

4.如果MassHunter工作站在之前曾经打开和关闭过，请确认在再次打开工作站之前，关闭MassHunter所有的进程；双击桌面上的图标，在弹出的窗口点击Shut Down，等待所有的Status都变为Terminated后，点击Close。

然后再打开MassHunter工作站。

注意：在MassHunter采集软件关闭后，再次打开之前，必须执行上面的操作，否则无法进入采集软件。

5. 点击Standby按钮，检查前级真空（典型值应≤2.5Torr）和高真空，等到高真空≤2×10-6Torr后，关闭工作站。

6. 进入仪器诊断软件界面，在菜单上选择Connection > Connect，输入IP地址192.168.254.12，点击OK。

根据不同的情况，选择不同的Condition HV的模式。

0.6 Hour Cycle (Quick Vent) 适用于Q-TOF短暂关机后的Condition，比如更换泵油，短时间停电等。

2 Hour Cycle (Optics Service) 适用于对Q-TOF关机，进行简单维护后的Condition，比如清洗毖绅管等。

8 Hour Cycle (TOF Service) 适用于对Q-TOF关机，进行比较长时间的维修后的Condtion，比如仪器出现故障后Agilent工程师上门维修后再次开机。

13 Hour Cycle (Installation) 适用于Q-TOF安装时第一次开机后的Condtion；当者是比如长假关机后再次开机。

7. 标签栏显示Instrument ON/OFF界面，点击Condition HV。

8. 当Condition HV结束后，在File菜单上选择Connection > Disconnect，关闭TOF Diagnostics软件。

9. 重新进入MassHunter工作站。

二、调谐和校正准备调谐和校正将稀释好的TOF-ESI调谐液装入Calibrant B瓶中，调谐液的配置方法见下表(以制备100mL 调谐液计算)。

切换到调谐界面左键/当右键点击Q-TOF图标，选择On。

然后在Context下拉框中选择Tune，切换到Tune界面，如果出现Method Editor对话框，选择No。

接着出现Agilent MS Acquisition Worklist Pane对话框，选择No。

对于Q-TOF仪器，TOF部分的调谐和校正有下面几种模式：Initial Tune，Standard Tune，Quick Tune，Check Tune，Set Detector Gain以及Calibration。

Initial Tune做的项目最多，所需时间最长；Standard TOF Tune次之；Quick Tune最少。

Check Tune只是检查仪器状态，不会修改任何参数；Calibration只校正质量轴。

注意：建议每天仪器运行之前运行Calibration。

三、方法编辑在桌面上双击数据采集软件图标，进入MassHunter数据采集界面。

在这个界面中完成所有HPLC和Q-TOF的方法参数设置。

新建方法通过菜单File>New>Method创建一个新的方法。

当者通过菜单File>Open>Method来打开D:\MassHunter\Methods\目录下的默认方法Default.m。

在这个方法的基础上创建新的方法。

注意：不建议使用已有方法直接选择“另存为”来创建新方法，最好的办法就是像上面所述通过全新的方法模板来创建新方法。

自动进样器选项卡点击自动进样器页面(h-ALS-SL)，设置自动进样器的参数。

Standard injection是指进样器吸取样品后直接进样分析。

Injection with Needle Wash是指进样器吸取样品后，会先自动清洗进样针的外壁，然后再进样分析。

Use Injection Program是指对自动进样器的动作按照自己的需要进行编程，来决定自动进样器一步步如何操作。

这种模式很少用到，但对一些特殊的分析，如氨基酸柱前衍生自动分析是最佳的选择。

一般建议设置为Injection with Needle Wash，即带洗针的进样方式，这样可以显著减少样品交叉污染。

对于一般的应用来说，不要设置High Throughput。

其作用是通过减少两次进样的间隔时间，加快样品分析的速度。

这个选项可以一定程度减少每次进样运行之间的等待时间，但若设置不当也可能会增加交叉污染，降低重现性。

Options和Carryover Reduction页面下的参数一般不需要设置，使用默认值即可。

泵选项卡点击泵的页面，设置泵的参数。

在Setup页面设置泵的流量、流动相比例等。

Timetable可以让您建立一个梯度程序。

也可以编写流量和压力的时间程序。

可以通过Insert、Append、Cut、Copy和Paste等功能方便的进行编辑。

在Option菜单下可以设置冲程、压缩因子、及最大流量梯度等。

柱温箱选项卡在柱温箱编辑画面输入柱温箱温度。

大部分应用情况下，左右加热的温度设置成相同值。

Time Table和Options内的参数一般不需设置，使用默认值Q-TOF选项卡Time Segments可以设定不同的质谱采集时间片断，在每个时间片断内还可以设定不同的试验参数(Experiment #)。

在Q-TOF的参数里面，如果某个参数后标有Seg，则说明这是可以按照Time Segment来设置的参数。

如果某个参数后面标有Expt，则说明这是可以按照Experiment来设置的参数。

General在这里设置离子源的各种参数。

在此主要应考虑进入质谱的流动相的实际组成及流量确定适合的Gas Temp，Drying Gas，Nebulizer的值。

依据化合物特性及分子量大小来确定适合的Fragmentor，Skimmer，OCT1 RF Vpp，VCap等。

Source在此设置离子的极性为正还是负，数据保存方式是棒状图还是轮廓图。

以及LC流出的流动相是流入MS还是废液等。

Acquisition-TOF Mode在Acqisition界面，如果选择MS (Seg)，则仪器按照TOF模式采集一级质谱数据。

这里设置采集的质量范围，采样速度等。

Acquisition-Auto MS/MS Mode在Spectral Parameters标签页设定一级和二级质谱的Mass Range，采集速度等参数。

四极杆的分辨率(Isolation Width)一般推荐使用Medium (~4 m/z)。

Collision Energy设置碰撞能量。

可以使用固定数值，也可以使用线性变换当用表格设定。

在Precursor Selection I标签页设定母离子选择的相关参数：母离子的数量，是否使用动态排除当静态排除等。

在Precursor Selection II标签页设定母离子的优选价态。

在Preferred/Exclude标签页设定母离子优选当者排除的m/z值、保留时间、碰撞能量等。

Target MS/MS Mode在Spectral Parameters标签页设定一级和二级质谱的Mass Range，采集速度等参数。

Collision Energy设置碰撞能量。

可以使用固定数字，也可以使用线性变换当用表格设定。

在Target List标签页设定目标母离子及其相关参数，如保留时间，四极杆分辨率、碰撞能量、采集时间等。

Ref Mass这个界面来设定是否使用内标校准及内标离子，包括内标离子检测窗口和门槛。

常用的正、负参比离子如下表。

对于正离子模式，还经常使用149.02332，这是增塑剂的离子，在流动相中经常存在。

设置参比时，选择2个不同的离子即可。

参比溶液使用９５％乙腈/5%水来配制。

参比物质的加入量可以根据实际参比离子的响应做调整。

一般我仧希望参比离子的响应丰度能够在10000以上。

对于Dual ESI离子源，参比溶液是通过参比Nebulizer导入的。

ChromatogramChromatogram界面来设置在运行中实时监视的信号。

比如可以显示TIC，EIC，BPC等等。

Properities在Properties选项卡设定方法路径、前运行及后运行脚本等信息。

在Description中可以输入方法说明信息。

保存方法通过File菜单选择Save>Method，当者点击方法保存按钮保存当前方法。

也可以通过File 菜单选择Save As>Method来给方法另存成其他名字。

四、运行单针样品打开样品栏，输入样品名字、瓶号、数据文件名以及数据保存路径等。

Injection Volume若为-1，则表示进样量为方法里面自动进样器参数下的进样量。

若为一个有实际意义的值，则实际进样量就是该数值，方法里面自动进样器参数下的进样量被忽略。

调整实时绘图：在实时色谱图显示区单击鼠标右键，单击Change，在弹出的对话框中左侧选择想要监视的信号单击Add添加，设定范围后，单击OK。

五、编辑和运行Worklist工作表是自动进行样品分析的一系列指令。

使用工作表，可对多个样品实现自动进样分析创建工作表通过File菜单选择New>Worklist创建新工作表。

工作列表面板点击右键，通过弹出的菜单可以实现添加单个当多个样品，复制，插入等功能。

这和通过Worklist菜单能实现的功能相同。

添加一个样品从Worklist菜单中选择Add Sample 。

工作列表表格就添加了一行新的样品。

在工作列表表格输入以下样品信息：样品名称，样品位置，方法，数据文件名称，样品类型，进样体积，注释和级别名称等。

添加多个样品从Worklist菜单选择Add Multiple Samples。

在Sample Position 选项卡下，填写样品名称，数据文件名称，调用方法，方法路径以及数据文件储存路径等。

点击sample Position选项卡，选择要添加的样品所放置的位置。

点击并拖动鼠标来确定一个邻近的区域；在键盘上按住Ctrl点击并拖动鼠标，可以选择其不相邻的位置的样品；使用键盘的Shift+Ctrl 键在相同地方选择多个样品。

点击OK 关闭Add Multiple Samples 对话框。