叶绿素a测定实验报告
（一）实验目的及意义
水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。

（二）水样的采集与保存
1.确定具体采样点的位置
2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍
3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L
4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL
5.将采样瓶拧上并编号
6.用GPS同步定位采样点的位置
（三）仪器及试剂
仪器：
1.分光光度计
2.比色池：10mm
3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）
4.研钵
5.常用实验设备
试剂：
1.碳酸镁悬浮液：1%。

称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。

每次使用时要充分摇匀
2.乙醇溶液
（四）实验原理
将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。

将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。

（五）实验步骤
1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。

2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。

3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。

将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。

此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。

4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。

（六）结果显示
从各波长的吸光度中减去波长750nm的吸光度，作为已校正过的吸光度D，按下面公式计算叶绿素a的浓度：
C a=(11.64D663—2.16D645+0.10D630×V1)/(V2L)
式中：Ca——叶绿素a 的浓度，mg/L;
V1——提取液的定容体积，mL;
V2——过滤水样的体积，L
L——比色池的光程长度，mm
D——已校正过的提取液吸光度
(七)注意事项
1. 使用的玻璃器皿和比色皿均应清洁、干燥、无酸，不要用酸浸泡或洗涤。

2. 750nm处的吸光度读数用来校正混浊度。

3. 使用斜头离心机时，容易产生二次悬浮沉淀物。

为了减少这一困难，使用外旋式离心机头，在离心之前瞬间加入过量的碳酸镁。

4. 因为叶绿素提取液对光敏感，故提取操作等要尽量在微弱的光照下进行。

5. 吸收池事先要用乙醇溶液进行池校正。

6. 750nm的吸光度是检查乙醇溶液浊度的。

用10nm吸收池，750nm的吸光度在0.005以上时，应将溶液再一次充分地离心分离，然后再测定其吸光度。