生化试验
（3）牛乳培养基生长： 能分解乳糖产酸使酪蛋白
凝固，并产生大量气体冲击 凝固的酪蛋白呈蜂窝状，气 势凶猛，这个现象称为“汹 涌发酵”。
生化试验
（4）疱肉培养基生长：
用于
封闭
细菌生长迅速，肉
的凡 士林
渣不被消化，但呈粉
被顶
起
红色，肉汤浑浊，并
产生大量气体。
气
体
产
生
生化试验
（5）血清学试验：
机体免疫功能下降：如接受免疫抑制剂、放疗或化疗的患者； 糖尿病、慢性肝、肾疾病及老人、婴幼儿、早产儿等。
菌群失调：长期或大量应用广谱抗菌药物无效的患者，均可 诱发厌氧菌感染。
厌氧菌感染的临床特征
局部有气体产生为重要指征之一； 发生在黏膜附近的感染； 深部外伤如枪伤、人或动物咬伤后的继发感染； 分泌物有恶臭或暗红血色或在紫外光下发出红色荧
微生物检验技术精品课程
厌氧菌
医学技术系 微免教研室
学 习目 标
１
熟悉厌氧菌的分类及培养特点
２
熟悉梭状芽胞厌氧菌的生物学特性
３ 掌握厌氧菌的微生物检验程序
案例引入
患者赵某，女，63岁，患糖尿病10年。 半个2月天前后因检足验部科不以慎“被只玻检璃出划皮伤肤到癣社真区菌医， 院未就检诊出，厌医氧生菌给”予为口由服发抗回生临素床治重疗新（采具集体标 用本药。不…详…）。两周后患者伤口仍不愈合， 并出现发黑、肿胀、发臭，有黑色脓血渗 出，新遂标到本某收三到级后医第院2治天疗，。检医验院科以报“告疑“为检 厌出氧厌菌氧感菌染（”疑收为治产入气院荚，膜随梭后菌实）习”医。生随采后 集患伤者口经附临近床坏对死症组治织疗，后送病检情验好科转微出生院物。室 查厌氧菌。
伤口需形成厌氧微环境
– 伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染 – 大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血 – 有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口 无侵袭力，仅在局部繁殖，外毒素致病
对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin) 质粒编码的破伤风痉挛毒素(tetanospasmin)
亚种；多为体内正常菌群，存在于皮肤、口腔、上呼吸道、 肠道和泌尿生殖道。易引起这些部位的内源性感染。
厌氧菌的分类
梭状芽胞 产气荚膜梭菌
厌氧菌 厌氧菌 (10％) （40属、 400种)
破伤风梭菌 肉毒梭菌
球菌 G＋ 杆菌
无芽胞厌氧
球菌
菌（90％） G－ 杆菌
梭状芽胞杆菌
梭状芽胞杆菌属（Clostridium）简称梭菌属，是厌
1.破伤风梭菌（C.tetani）
破伤风梭菌是梭菌属中常见 的一种芽胞杆菌，能引起破 伤风。
菌体细长，约为2.0～ 5.0×0.5～1.5μm 。有周 鞭毛，能运动，无荚膜。芽 胞正圆形大于菌体，位于菌 体顶端呈鼓槌状。
鞭毛
破伤风杆菌镜下形态（18 -24h） 革兰染色
破伤风杆菌镜下形态（48h） 革兰染色
培养特性
专性厌氧，在梭菌培养基上37℃培养48h，菌落直径2～4mm， 扁平、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。在庖肉培 养基中，肉渣部分消化，微变黑，有少量气体。生成甲基 硫醇及H2S，导致培养物有腐败性恶臭。
破伤风杆菌在厌氧平板上羽毛状菌落
左侧：在疱肉培养基上生长 右侧：阴性对照
致病条件与毒素
氧芽胞杆菌（anaerobic sporeforming bacilli）的 唯一菌属，有130个种。 革兰染色阳性，芽胞呈圆形或卵圆形，直径大于菌体， 位于菌体中央，极端或次极端，使菌体膨大呈梭状。 本菌属细菌在自然界分布广泛，临床有致病性的主要 有破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌与艰难梭菌 等。
光，或脓汁中有硫磺颗粒即为放线菌感染； 某些抗生素治疗无效的感染； 革兰染色着色不均、形态奇特、呈明显多形性；或
镜检见细菌而需氧培养为阴性者。
厌氧菌的分类
分为两类： 一类为有芽胞厌氧菌，只有一个属，即梭菌属，共有130个
种，以芽胞形式存于体外。 另一类为无芽胞厌氧菌， 包括40多个属，300 多个菌种和
若在卵黄平板上， 加入抗α毒素的抗血清， 则不出现混浊，此现象 称为Nagler反应，可 用于该菌的鉴定。
左边加抗血清 右边为对照
– 属神经毒(neurotoxin)，毒性极强(对人致死量<1µg) – 蛋白质，不耐热
1. 破伤风痉挛毒素（tetanospasmin）：毒素作 用于脊髓前 角运动细胞，封闭了抑制性神经 纤维释放抑制性神经介质，导致肌肉的强直 性收缩。
2. 破伤风溶血素（tetanolysin）：作用机制目前 尚不明确。
作用机制与免疫性
作用机制见图 破伤风免疫属外毒素免
疫，主要是抗毒素发挥 中和作用 抗毒素人工免疫
典型症状
– 苦笑面容 – 角弓反张 – 其他
微生物学检查法
一般不进行涂片镜检和分离培养 典型的症状和病史即可作出诊断
防治原则
防止创口厌氧微环境的形成 特异性预防：注射破伤风类毒素 紧急 预防 ： 注射 破 伤风 抗 毒素 （ tetanus
生化试验
（1）血琼脂培养生长： 菌落周围出现双层溶
血环，内层β溶血，外 层α溶血，好似靶状。 菌落呈灰褐色，与空气 接触30min后，可逐渐 变为灰绿色，这是本菌 的特征之一。
生化试验
（2）卵黄琼脂培养生长：
菌落周围出现乳白色 浑浊圈，是由细菌产生 的卵磷脂酶（α毒素） 分解蛋黄中卵磷脂所致； 若在培养基中加入α毒 素的抗血清，α毒素可 被中和。
定义
厌氧性细菌(anaerobic bacteria)指一群
在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件 下才能生长繁殖的细菌。
厌氧菌感染的条件
局部组织的氧化还原电势降低：如血管损伤、烧伤、动脉硬 化等，可造成局部组织的缺血、缺氧等。
皮肤黏膜屏障被破坏：如大面积外伤伴有需氧菌感染，为厌 氧菌感染提供了条件。
antitoxin，TAT） 特异性治疗：早期足量抗毒素及抗生素
2.产气荚膜梭菌(C.perfringens )
两端平切粗大杆菌 芽胞位于次极端，呈椭圆形，不大于
菌体 无鞭毛 体内有明显的荚膜
大小：为(1－2)μm ×(2－10)μm 。 芽胞：位于菌体中央或近端，卵圆形，直 径大于菌体的直径。 荚膜：在人和动物活体组织内，或在含血 清的培养基内生长时可形成荚膜。