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主要培养基配方

培养基
培养基是植物组织培养的重要基质。

在离体培养条件下,不同种植物的组织对营养有不同的要求,甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同,只有满足了它们各自的特殊要求,它们才能很好地生长。

因此,没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官,在建立一项新的培养系统时,首先必须找到一合适的培养基,培养才有可能成功。

一主要培养基配方:
1.CC培养基(mg/L)
2.NB培养基
3.N6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。

其特点是成分较简单,KNO3和(NH4)2SO4含量高。

在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。

4.MS培养基
是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。

特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液。

其养分的数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要。

它的硝酸盐含量较其他培养基为高,广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养,效果良好。

有些培养基是由它演变而来的。

5.MSM培养基
6.改良怀特培养基
是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。

1963年又作了改良,称作White改良培养基,
提高了MsSO4的浓度和增加了硼素。

其特点是无机机盐数量较低,适于生根培养。

二培养基的配置
在植物组织培养工作中,配制培养基是日常必备的工作。

为简便起见,通常先配制一系列母液,即贮备液。

所谓母液是欲配制液的浓缩液,这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取,而且还便于低温保藏。

一般母液配成比所需浓度高10-100倍。

母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

配制时注意一些离子之间易发生沉淀,如Ca2+和S042+,Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后,会产生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。

配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。

药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。

药品的称量及定容都要准确。

各种药品先以少量水让其充分溶解,然后依次混合。

一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液,其中维生素、氨基酸类可以分别配制,也可以混在一起。

母液配好后放人冰箱内低温保存,用时再按比例稀释。

母液的配制方法:
•单配法:将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。

一般用a:b表示,即每b 毫升溶液中含有a毫克溶质。

•混配法:将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量,分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混合母液,浓度可用a mg/L表示,即配制一升培养基吸取该母液a ml. •生长素配制时可先用少量95%酒精助溶。

2,4—D可用0.1mol/L的NaOH或KOH助溶,加入温水定容。

生长素常配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中备用。

•细胞分裂素类一般先用少量1N盐配溶解后,再加入温水冷却后定容,
•铁盐配法(MS为例):在装有400ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒苛性钠,溶解后加入3.73g EDTA-Na2,加热使其全部溶解,然后边搅拌边慢慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解,冷却后定容至500ml,置于冰箱中备用。

常用培养基成分表(单位:mg/L)
根据培养基配方,算好母液吸取量,并按顺序吸取,然后加入蔗糖溶液,并加入蒸馏水定容,并用0.1-1mol/l的HCl或NaOH调整pH值,加入琼脂加热熔化,配制好的培养基要趁热分注,倒入三角瓶等培养器皿中,封口准备消毒。

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