《文件已阅声明表》《Procedure circulation form》文件名称:丙戊酸检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02文件修改记录页（Procedure amendment form）表号: KM-MP03•02•03文件信息表(Procedure information form)丙戊酸检测作业指导书（Valproic Acid by Abbott Axsym）1. 原理（Test principle）:荧光偏振免疫分析法（FPIA）：荧光标记抗原由于分子量小，失去大部分偏振光性，当抗原与大分子的物质结合后，分子量极大，荧光偏振光度就变大。
标本中抗原与一定量的标记抗原和抗体进行竞争反应，样本中的抗原越多，与抗体结合的标记抗原就越少，从而激发的荧光偏振光度也就越少，通过已知浓度的抗原与荧光偏振光性的关系，可以测量未知浓度的物质。
2. 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:样本类型(sample type)：血清(serum)、血浆(plasma)（肝素，EDTA抗凝、枸橼酸、草酸抗凝）可用于丙戊酸的检测。
拒收标本（Specimen rejection）：严重溶血、脂血、标本。
标本用量(volume)：200uL血清/血浆储存条件(sample storage conditions)：在2--8°可保存24小时3、试剂(Reagent)：3.1美国AXSYM 原装试剂。
3.1.1试剂内组份(components)：试剂盒（Reagent pack）100人份，2-8℃保存，使用累计时间不可超过112小时。
试剂1：一瓶（14.5mL）〈25%的羊多克隆丙戊酸抗血清，保存于普通的蛋白稳定剂中。
防腐剂：叠氮化钠。
（试剂瓶1）试剂2：一瓶（8.6 mL）预处理液：保存于TRIS缓冲液中的表面活性剂。
防腐剂：叠氮化钠。
（试剂瓶2）试剂3：一瓶（15.1 mL）〈0.01%的丙戊酸荧光标记物，保存于含有表面活性剂的TRIS缓冲液中。
（试剂瓶3）3.1.2其它试剂：探针清洗液：TEAH：氢氧化四(羟乙基) 铵，四瓶装（110mL每瓶）或两瓶装（220mL每瓶），含2%氢氧化四(羟乙基) 铵。
15-30℃保存。
4号液：Diluent：稀释液，1瓶（10L）稀释液含0.1M磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗生素。
15-30℃保存。
其它必需：Matrix cells：纤维杯Reaction Vessels：RV杯（反应杯）3.2 试剂准备：将试剂从冰库中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。
Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time; New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Record the results.4 仪器（Instrument）：美国AXSYM ABBOTT.4.1 仪器准备（prepare apparatus）：使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的蒸馏水，加入足够的4号液、纤维杯、RV杯。
然后运行仪器操作软件。
将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。
5.安全防范（Safety Precautions）：操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。
6校准（Calibration）：6.1校准品储存和使用(calibration material storage and usage)：校准品：美国AXSYMABBOTT原装校准品（为液体标准品）。
要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。
Stop using overdue calibration e it within expiration date,storage in 2-8℃6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准：(if one of the two happens, recalibration )⑴试剂批号改变(reagent lot changes)⑵根据质控需要进行校准(recalibration based on quality control problem)(3)校准周期（frequency of calibration）：两周(two weeks)校准结果判断标准: 仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做6.3步骤：将试剂盒放入试剂转盘后，在ORDER LIST内申请校准，采用专用条码样本杯座，将校标液(每杯7滴)按指定位依次放入样本架，开始校准。
（非新试剂盒不做此步）。
每个样品杯至少加入样品150ul。
将样本杯按仪器指定位置放好后，按“RUN”键开始。
所有浓度的质控，如质控在控则校准通过。
7操作过程：(Procedural Steps)7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。
7.2取出空样本架，将样本按所做项目数（每个项目200 ul）加入已编好实验号的一次性塑料管中，再将塑料管按实验号顺序放入样本架，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架放入样品槽中。
7.3进入ORDER LIST，在Patient(F6)中指定样本位置，输入项目，输入完毕以后按F1退出，核对实验项目准确无误后点击RUN运行。
结果出来后，在菜单RESULT中按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。
数据联机入系统(send data to LIS)数据审核(data checkup)：确认联机是否正确，实验号与样本架号的对应，原始导出结果与系统结果是否对应等。
8质量控制(Quality control)：使用伯乐质控品做质控，每工作日至少做两个浓度的值，二个浓度其靶值和SD 参照质控数据。
丙戊酸最大允许误差ALE为15%，室内质控CV为≤5.14%（低值），≤5.28%（高值），偏移为（低值）SD≤1.73 mg/L（高值）SD≤6.06 mg/L根据公式计算△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65，选择的质控规则为1-3s,2-2s,R4s,10x，当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理。
9稀释(dilution)：9.1分析测试范围（AMR）：0.70-150.00 mg/L9.2病人结果报告范围（CRR）：0.65—600.00 mg/L当结果超过AMR时，需要稀释，仪器会自动提示稀释，可稀释倍数为1：2和1：4按F2键选定需要稀释是项目后按F4（DILS/REPS）键，选择需要的稀释倍数后按F6键确认。
仪器会自动计算结果。
最大稀释倍数（dilution times）:1:410计算(Calculations)：N/A11 参考范围：50.0-100.0mg/L12 结果解释(result interpretation)：N/A13方法的局限性（Method Limitations）：和其他检测项目相同，雅培苯妥英钠检测的结果要和有意义的临床信息或其他的方法结合起来分析才有意义。
13.1精密度（Precision）:13.2灵敏度（Sensitivity）：0.6 5mg/L（0.70 mg/L ）13.3特异性（Specificity）：可参见说明书。
13.4分析测试范围（AMR）：0.70-150.00 mg/L13.5病人结果报告范围（CRR）：0.65—600.00 mg/L13.6干扰物质（Interfering Substances）：胆红素（bilirubin）20mg/dl、溶血影响（hemolysis）：HB1000mg/dl、000mg/dlHB、1100mg/dlTG影响<5%。
2.0-10.0g/dlTPro影响<10%丙戊酸的主要代谢产物3-酮基-丙戊酸是主要干扰因素，16ug/ml3-酮基-丙戊酸对浓度50-100ug/ml的干扰小于10%，3-羟基丙戊酸、4-羟基丙戊酸、2-丙基-戊二酸等丙戊酸的代谢物对其也有干扰。
13.7注意事项（Notices）：仅供体外诊断使用(use only for invitro diagnosis)13.8其他（Others）：方法学比较或项目的特殊要求等。
14 临床意义：1．有效药浓度：50~100mg／L丙戊酸为短链脂肪酸，是唯一既不含芳香环又不含氮元素的抗癫痫药物，患者对丙戊酸治疗的疗效取决于癫痫的类型、病情的严重程度和个体的药动学差异。
一般说来，血清丙戊酸浓度达40~50mg/L水平后，病情多半有所改善；100mg/L疗效仍不理想者，可试将谷浓度提高到100mg／L以上。
其它抗癫痫药物的有效药浓度上限都是以开始出现不良反应的浓度为界线的，但丙戊酸却不是这样。
目前还未能找到丙戊酸出现不良反应的药浓度，丙戊酸有效药浓度的上限定为100mg/L，主要是因为血药浓度再升高，疗效似无明显改进，而发生不良反应的机会有可能增加。
丙戊酸是一个起效慢的药物，可能在达到合适药浓度以后6个月才能有效地控制癫痫发作。
因此要通过一段时期的观察才能评价其疗效。
2．潜在中毒浓度：未定15参考文献：1）临床生物化学和生物化学检验.2）美国AXSYM 丙戊酸试剂说明书3）中华医学检验全书4）美国AXSYM操作说明书。