实验方案镧铈对铜胁迫下豌豆种子萌发和生长的影响(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发影响的显效剂量筛选(1)浓度梯度设计：LaCl3/ CeCl 3溶液配置：先配置1g•L-1的LaCl3/ CeCl 3溶液母液，然后将母液分别稀释成浓度为5、10、20、40，60 mg•L-1梯度浓度，调节PH（HCL/NAOH）至6.5，对照(CK)为PH调节至6.5的去离子水。
重金属Cuso4浓度的设置：10、25、50、100、200、400 mg•L-1，对照用蒸馏水。
(2)试材培养种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。
（3）实验设置：CK，La，Ce，Cu（共4组18个浓度57个样品）（4）试材处理：选取LaCl3、CeCl3和CuSO4各个梯度溶液溶液，豌豆种子经预处理后用各个梯度溶液浸没处理，对照用蒸馏水，置于25±1℃浸种24h后，将处理后种子均匀排列在直径9cm、垫有2层滤纸的培养皿中，每处理加入一定量水培养（以没过种子2/3为标准），每处理3皿重复，每皿20粒。
指标测定方法：种子发芽第三天测α—淀粉酶，第四天测发芽势，前三天测发芽指数和发芽率，第五天测量根长、茎长，第六天测根系活力、叶绿素含量、可溶性蛋白质、可溶性糖、SOD、POD、CA T、MDA.2．La(Ⅲ)和Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发及保护酶的影响(1)试材培养种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。
（2）实验设置：在上一步骤中分别筛选出LaCl3、CeCl3的低剂量、适宜剂量、高剂量三个有效浓度和CuSO4的一个有效浓度，分别记为A1，A2，A3；B1，B2，B3；C。
（3）实验步骤：有以下几组：A+C:A1+C、A2+C、A3+CB+C:B1+C、B2+C、B3+CA+B+C：A1+B1+C 、A1+B2+C 、A1+B3+C、A2+B1+C、A2+B2+C、A2+B3+C、A3+B1+C 、A3+B2+C、A3+B3+C酸盐缓冲液（PBS）配制方法磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.2M NaH2PO4/ml7.0 61.0 39.07.7 89.5 10.57.8 91.5 8.5Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/LNa2HPO4·12 H2O分子量＝358.22 0.2M溶液含71.64g/LNaH2PO4·H2O分子量＝138.01 0.2M溶液含27.6g/LNaH2PO4·2H2O分子量＝156.03 0.2M溶液含31.21g/L0.01M PBSPBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2) PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。
保存于4℃冰箱中即可。
母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。
然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。
0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。
若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。
另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）7.0 38 627.8 8.5 91.50.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。
在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。
如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。
PH 7.6 7.4 7.2 7.0H2O 1000 1000 1000 1000NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4PBS缓冲液称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO412H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。
0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸馏水至1000ml ;乙液：0.05mol/L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。
将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI7.17 70.0 30.07.38 80.0 20.07.73 90.0 10.08.04 95.0 5.0实验01根系活力的测定（TTC法）（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
3.1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L 琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
三、实验步骤（1）TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
（2）称取根尖样品0.5g，放入10ml烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～3h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。
（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
（3）把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出甲月替。
红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。
四、结果计算四氮唑还原强度（mg/g(根鲜重)/h）＝四氮唑还原量（mg）/[根重（g）×时间(h)] 实验02 脯氨酸含量的测定（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；5. 大试管；6. 普通试管；7. 移液管；8. 注射器；9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。
（三）试剂1. 酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L 磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中；2. 3％磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml；3. 冰醋酸；4. 甲苯。
三、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。
（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6μg/ml。
（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml 冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。
（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。
（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml）。
2. 样品的测定（1）脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g，分别置大管中，然后向各管分别加入5ml3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。