当前位置:文档之家› SOD酶活性测定方法

SOD酶活性测定方法

SOD酶活性测定
所需药品:
(1)0.1mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液:
A液:0.1mol/l磷酸氢二钠液
B液:0.1mol/l磷酸二氢钠液
1毫升B+10.76毫升A
(2)0.026mol/l蛋氨酸液(Met):现用现配
称取0.3879克蛋氨酸,用1号液定容至100毫升。

(3)75*10-5mol/l氯化硝基四氮唑蓝(NBT)液:现用现配
称取0.1533克NBT,先用少量蒸馏水溶解,然后定容至250毫升。

(4)1umol/lEDTA-2钠和2*10-5mol/l核黄素混合液
(5)0.05mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液
(6)石英砂
实验步骤:
1.酶液制备:称取0.5克鲜叶,放入研钵中,加入3毫升5号液和少量石英砂,于冰浴中研成匀浆。

然后用5号液定容至8毫升,于0~4℃、13000g时离心15分钟,上清液即为酶提取液。

酶液可在低于0℃下的环境中保存。

2.按下表加入试剂:
试剂摇匀后,迅速遮光处理1号杯,其余杯在25℃、光强为4000勒克司的条件下照光处理15分钟,然后立即遮光。

接着在560nm下,以1号杯作为空白测定其余杯中溶液的光密度。

假定2、3号杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为100%,然后按下式分别计算其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率。

M/N=100/X
M——2、3号杯中溶液的光密度的平均值
N——其余杯中溶液的光密度值
X——其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率
然后以酶液量为横坐标,以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率(X)为纵坐标制作曲线,根据线性好的曲线所得出的函数关系计算抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量,以该酶液量作为1个酶活单位。

结果计算:SOD活力按下式计算:
A=V*1000*60/(B*W*T)
A——酶活力(酶活力单位·g-1·FW·h-1)V——酶提取液体积(毫升)
B——一个酶活力单位的酶液量(微升)W——样品鲜重(克)
T——反应时间(分)
因测定样品数量多时也可用下列简式计算:A=(D1-D2)*V*1000*60/(D1*B*W*T*50%)D1——2、3号杯光密度的平均值
D2——测定样品的光密度值。

相关主题