1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中;
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42g
KH2PO40.27g
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解;
3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L;
4. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
2×冻存液配制(10ml)
取下列液体加于15ml离心管:
无血清培养基4ml
胎牛血清4ml
DMSO 2ml
置于4℃保存。
L.B培养液的配制
称取下列试剂,加入1L烧杯中;
Bacto-tryptone 10g
Bacto-yeast exact 5g
NaCl 10g
加蒸馏水至1L,分装于两个500ml瓶子中;
高压灭菌;
置于4℃保存。
L.B培养基
称取下列试剂,加入1L的锥形瓶中;
Bacto-tryptone 5g
Bacto-yeast exact 2.5g
NaCl 5g
琼脂糖7.5g
加蒸馏水至500ml;
用铝箔包紧瓶口,高压灭菌;
待冷却至90℃时取出置于超净台;
待冷却至50℃~60℃时加入氨苄青霉素(终浓度为50~100μg/ml);
倒入细菌培养皿中,大约每个25ml左右;
置于超净台冷却1~2h,待胶凝固后用封口胶封好培养皿,标记日期,翻转后置于4℃冷库保存。
将下列试剂加入1L的烧瓶中;
NaCl 87.66g
Tris Base 24.2g
加蒸馏水900ml,充分搅拌混匀;
加HCl调pH至7.4;
加蒸馏水至1L;
加10ml Tween20。
PLC Lysis Buffer
Final concentration 100ml 500ml 1M Hepes(pH7.5) 50mM 5ml 25ml 5M NaCl 150mM 3ml 15ml Glycerol 10% 10ml 50ml 50mM MgCl2 1.5mM 3ml 15ml Triton×100 1% 1ml 5ml 0.5M EDTA(pH8.0) 1mM 200μl 1ml 0.1M NaPPi 10mM 10ml 50ml 0.5M NaF 10mM 2ml 10ml
封闭液
1×TBST 50ml
脱脂奶粉 2.5g
发光剂
100mM Tris Base(pH8.5)10 ml
250mM Luminol (in DMSO) 50 μl
90mM P-Coumaric Acid (in DMSO) 22 μl
30%H2O2 2.75 μl。