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常用固定液的配制

常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩。

若材料坚硬,可略减冰醋酸,略增福尔马林。

若材料易收缩,可稍增加冰醋酸。

久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。

此液又可作保存液。

固定时间最多10h。

如果用在植物胚胎的材料上,改用下面的配方,效果较好:50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液(FPA)福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织,通常固定8~24h,可长久保存。

3. 酒精-醋酸-氯仿固定液(卡诺固定液,Carnoy fixative)配方Ⅰ:纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ:纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ:甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料,为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。

固定时间不宜过久。

4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6(6~10)ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织,尤其适用于萌发的花粉管的固定。

通常固定24h,亦可长久保存。

5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。

6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同,可分为强、中、弱3种配方:(1)弱液配方:10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml(2)中液配方:10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml(3)强液配方:10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料,如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。

固定时间较短,一般为。

1h,但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至12~24h数小时,最长可固定中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。

为了易于渗透,可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。

固定时间12~24h。

强液配方用于固定木质根、茎、成熟子房等。

为了易于渗透,可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。

固定时间12~24h或更长。

7. 铬酸-醋酸-福尔马林混合液这3种药品混合在一起所配成的各种固定液,通常称纳瓦申固定液(Nawashin fixative),简称Craf。

配方见下表:纳瓦申固定(ml)桑弗利斯纳瓦常备(ml)原(ml)Ⅰ4040401%铬酸13 15 10%铬酸8 1020 20 铬酸60 70 15 甲8冰醋酸10液79 40 40 45 75 20 蒸馏水3264 10 40 10 10 30 20 福尔马林乙液36908090607080蒸馏水甲、乙两液均为贮备液,使用之前才将二者混合。

适用于组织学和细胞学的研究材料。

柔嫩而含水多的材料,可选用Ⅰ或Ⅱ固定,坚韧而成熟的材料,可用高浓度的Ⅳ或Ⅴ,一般材料多用Ⅲ。

制作染色体和有丝分裂的纺锤体标本时,常用桑弗利斯固定液。

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ固定液的固定时间为12~48h,桑弗利斯液固定时间为4~6h。

8. 铬酸-锇酸-醋酸固定液(Flemming fixative)强液:10%铬酸水溶液3.1ml + 2%锇酸的铬酸(2%)水溶液12ml + 10%醋酸水溶液30ml + 蒸馏水11.9ml中液:10%铬酸水溶液0.33ml + 2%锇酸的铬酸(2%)水溶液0.62ml + 10%醋酸水溶液3ml +蒸馏水6.27ml弱液:10%铬酸水溶液1.5ml + 2%锇酸的铬酸(2%)水溶液5ml + 10%醋酸水溶液1ml + 蒸馏水96.5ml 此固定液需现用现配。

固定23~48h。

可用于各种植物组织的固定。

9.Lichent's固定液此固定液适用于固定丝状藻类和真菌80ml 福尔马林5ml +冰醋酸15ml + 铬酸水溶液1%.1. 番红水溶液番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。

用前过滤。

2. 番红乙醇溶液番红1g溶入50%(或95%)酒精,定溶至100ml。

用前过滤。

3. 固绿染液固绿0.1g溶入95%酒精,定溶至100ml。

4. 碘-碘化钾染液碘化钾溶入100ml蒸馏水,再加入1g碘,溶解后即可使用。

5. 苏丹Ⅲ(或Ⅳ)染液将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。

6.改良苯酚品红染液原液A:将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精,此液可长期保存。

原液B:将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。

原液C:将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。

染色液:取C液20ml,加45%冰醋酸80ml,充分混匀,再加入1g山梨醇,放置14天后使用,可保存3年。

7. 间苯三酚染液将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精(若溶液呈黄色,即为失效)。

8. 中性红染液将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水,用时稀释10倍。

9. 钌红染液将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水,现用现配。

10.龙胆紫染液将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。

现常用结晶紫代替。

必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。

11.铁醋酸洋红染液先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸,移去火苗,然后慢慢地分多次加入1g 洋红粉末(切记不可一次倒入)。

待全部倒入后,再煮沸1~2min,并悬入一生锈的小铁钉于染液中,过1min后取出,使染色剂略含铁质,以增加染色性能。

静置12h后过滤于棕。

色瓶中备用(置于避光处).12.苏木精染液苏木精的配方很多,常用的有如下3种:配方Ⅰ:苏木精水溶液0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中,静置24h后可使用。

配方Ⅱ:代氏苏木精(Delarfield's haematoxylin)甲液:苏木精1g + 无水酒精6ml乙液:硫酸铝铵(铵矾)10g + 蒸馏水100ml丙液:甘油25ml + 甲醇25ml分别配制甲、乙两液,将甲液一滴滴地加入乙液中,充分搅拌后,放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口,置于温暖和光线充足处7~10天,再加入丙液,混匀后静置1~2月,至颜色变为深紫色后,过滤备用,可长期保存。

配方Ⅲ:爱氏苏木精(Ehrlich's haematoxylin)苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾(钾矾)3~5g。

配制时,先将苏木精溶于酒精中,然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸,最后加入研细的钾矾,边加边搅拌,直到瓶底出现钾矾结晶为止。

混合后溶液颜色呈淡红色,放入广口瓶中,用纱布封口,自然氧化1~2月,至颜色变为深红色时即可过滤备用,可长期保存。

13.席夫试剂(Schiff's regent)将0.5g碱性品红溶入煮沸的蒸馏水,搅拌使其充分溶解。

冷却至50℃时,过滤于棕色细口瓶中,加入10ml1mol/L盐酸。

冷却至25℃左右,加入1g偏亚硫酸钾或钠(Na2S2O5或K2S2O5),振荡使其溶解,密封瓶口,置于黑暗低温处过夜。

次日检查,若染色液透明无色或呈淡茶色,即可使用。

若染色较深,可加入少量优质活性炭(0.5~2g),振荡1min,置于4℃冰箱中过夜,过滤使用。

此液配好后,应塞紧瓶塞,外包黑纸,贮藏于冰箱中。

14.硫堇染液将0.25g硫堇粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用。

使用此液时。

需用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能产生多色反应。

15.亚甲基蓝染液0.1g亚甲基蓝溶入100ml蒸馏水即可。

16.詹纳斯绿B(Janus green B)染液5.18g詹纳斯绿溶入100ml蒸馏水,配成饱和水溶液。

用时需稀释,稀释倍数应视材料而异。

染液(HE)曙红-苏木精17.曙红(Eosin),酸性染料,为最优良的动物细胞染料,与苏木精配合使用(复染)对动物组织进行对比染色。

苏木精的染液的配方同上。

曙红有以下配制方法:配方Ⅰ:曙红0.5g + 95%酒精100ml配方Ⅱ:曙红0.5g + 蒸馏水100ml配方Ⅲ:曙红0.5g + 95%酒精25ml +蒸馏水75ml18.蛋白胶亦称梅氏蛋白的制作将鸡蛋一个打破让蛋清流入烧杯内,用筷子充分条大雪花状泡沫,然后将它用双层纱布过滤到量筒中,经数小时或一夜,过滤出透明的蛋白液,此时再加入等量的甘油,稍稍振摇使两者混合,最后加入麝香草酚(thymol)(1:100)做防腐作用,可保存几个月到一年(4℃冰箱中)。

载玻片和盖玻片的清洗方法新载玻片的洗涤可分别将载玻片逐片投入到洗液中浸泡数小时,取出后先用自来水冲洗干净洗液,然后再用蒸馏水清洗两遍,最后投入95%酒精中备用,用时取出在玻片用干净的纱布擦干即可。

陈旧的切片标本,如再用其载玻片,可将其浸泡在肥皂水中煮30min左右,然后在热水中洗去残留的树胶及浆糊等,用清水冲洗干净放入洗液中浸1h,然后自来水冲洗干净洗液,再用蒸馏水清洗两遍,最后投入95%酒精中备用。

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