乙肝两对半定量测定技术
对HBV感染诊断、治疗的意义
邳州市中医院检验科李平
1、前言
乙型病毒肝炎是由乙肝病毒（HBV）感染引起的传染性疾病。
在全球范围内，乙肝的发病率均比较高，属于临床上常见的一种传染病。
因为乙肝病毒感染易转化为慢性乙肝，继而发展成肝硬化，肝癌，所以需要早诊断早治疗。
我国是乙肝病毒的高危流行地区。
在我国大部分医院，预防、诊断及治疗乙肝时，乙肝两对半的检测结果为主要依据。
通过乙肝两对半的检测结果，可将乙肝病毒活动性复制及传染性是否存在直接反映出来。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机的结合起来，可敏感的检测生物标本中微量的特异性抗体或抗原的一种临床检验方法。
因其操作简单，灵敏度高，经济安全，不需特殊设备等特点而在临床医学检验中得到广泛应用[1]。
然而，此方法属于定性检测方法，只能进行定性分析，“灰区”样本易导致漏诊。
同时在临床应用过程中，定性方法难以判断乙肝病毒感染复制情况，患者病情及疗效情况不能实
现动态的监测，使得其在临床中的应用受到一定的限制[2]。
近年来，乙肝两对半检测中开始采用定量检测方法，如时间分辨荧光免疫分析法（TRIFA），化学发光免疫分析法（CLIA）等，因这些方法具备的高灵敏度、强稳定性等优势，而在临床检测中得以迅速的推广，在一定程度上弥补了ELISA方法存在的局限。
2、我科乙肝两对半检测的现状分析
酶联免疫吸附实验（ELISA）法作为传统的传染病标志物检测技术，多年来一直被我科用于乙肝两对半、丙肝、梅毒等的实验室诊断。
鉴于其定性方法方法学的特性，应用受到极大的限制。
因此在2014年7月，我科引进了一台EFFICUTA全自动时间分辨荧光分析仪器，用于开展传染病标志物的定量检测。
该机器采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA），有效排除背景杂质光对检测结果的影响，可获得高灵敏度、高准确性的传染病标志物定量分析结果，不仅在早期诊断和判断是否痊愈中可以应用，而且可在治疗过程中实时监测治疗效果，对于临床治疗方案的制定给予实验室支持。
3、问题确立
对于传统项目因方法学改变而产生的收费差异，临床上还是存在一定的疑虑，尤其是肝病科，由于其科室（我院特色科室之一）的诊治的乙肝病人较多，医生多次向我科咨询：（1）转变方法学，定性和
定量检测的区别是什么？（2）定量检测的临床意义是否真的比定性检测更具有优势？对此，本人以乙肝两对半检测项目为例，选择肝病科病人，同时对其血液样本进行乙肝两对半的定性和定量检测，比较检测结果，评价两种检测方法在诊断乙型肝炎病毒感染中的差异，向临床医生介绍乙肝两对半定性和定量结果的区别和临床意义。
同时探讨TRFIA的临床价值，给临床医生、给病人选择检测项目提供参考依据。
4、文献查证
在我国总人口数量中，约有10%的人口为乙肝病毒携带者，预防、诊断及治疗乙肝时，乙肝两对半的检测结果为主要依据。
目前，酶联免疫分析法（ELISA）为我国检测乙肝两对半时较为常用的方法，此种检测属于定性检测。
由于定性检测方法存在一定的局限性，容易导致“灰区”样本漏诊的发生[3]。
近年来，部分医疗机构已逐渐采用定量检测方法测定乙肝两对半，逐步替代定性的ELISA方法。
常用的定量检测方法有放射免疫分析法（RIA），化学发光免疫分析法（CLIA），时间分辨荧光免疫分析法（TRIFA）等[4]-[6]。
因定量方法具备的灵敏度高、稳定性强等优势而广泛得应用于临床检测中，并在一定程度上弥补了定性ELISA方法存在的局限。
同时有报道指出，定量测定乙肝两对半与HBV-DNA血清水平的定量联合测定对乙肝的临床诊断，疗效观察和预后判断具有更大的临床价值，这是定性方法无法替代的[7]。
5、研究方法
1．检测对象
以2014年9月～2015年9月选择肝科病人400例，（其中住院病人190例，门诊病人210例）为研究对象，其中男226例，女174例；年龄22～81岁，平均（51.8±2.3）岁。
2．方法
2.1标本采集：住院病人收集肝病科病房护士早上抽取的病人空腹静脉血，门诊病人由采血室护士抽取病人静脉血，并及时分离血清。
2.2 ELSIA法检测：试剂来源于北京科卫临床诊断试剂有限公司，酶标仪是深圳华科瑞科的HR801仪器，乙肝五项定性检测严格按照试剂及仪器说明书进行操作。
2.3 TRIFA法检测：TRIFA检测时采用的试剂来于源苏州新波技术有限公司，仪器EFFICUTA全自动时间分辨荧光分析仪器，乙肝五项定量检测操作严格按照试剂及仪器说明书进行。
2.4 阳性判读标准：ELSIA法检测乙肝两对半参考范围全部为阴性，TRIFA检测的参考范围为：HBsAg为0-0.2ng/ml, HBsAb为0-10mIU/ml,HBeAg为0-0.5PEIU/ml, HBeAb为0-0.2PEIU/ml, HBcAb 为0-0.9PEIU/ml.
6、结果
ELISA方法与TRIFA方法的检测结果见表1和表2所示。
表1.两种方法检测乙肝两对半的阳性例数及构成比。